神経系におけるグリア細胞の機能の分子遺伝学的解析

神经系统胶质细胞功能的分子遗传学分析

• 批准号: 09259204
• 负责人: 岡野 栄之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09259204/
• 关键词: ショウジョウバエ; グリア細胞; Repo蛋白質; 転写因子; トランスジェニックフライ; Gal4; yeast one-hybrid法; 下流標的因子

ショウジョウバエにおけるグリア細胞の分化決定機構を明らかにすることを目的として、グリア細胞特異的転写因子Repo蛋白質の転写制御について解析を行った。ルシフェラーゼアッセイの結果、Repo蛋白質は転写を促進することにより下流標的因子を調節していることが明らかとなった。また、酵母の転写因子であるGal4の認識配列(UAS)をrepo cDNAの上流に有したトランスジェニックフライを作成し、全てのニューロブラストでGal4を発現させる系統と交配することにより repo 遺伝子産物を異所的に発現させた。その結果、異所的なM84(グリア細胞特異的なエンハンサー・トラップ系統)発現細胞が認められた。加えて免疫組織染色の結果、長軸索路の著しい断裂と運動神経の走行異常を認めた。また、repo 遺伝子産物をmidlineの細胞にて異所的に発現させた結果、同様に長軸索路の断裂を観察した。さらに、下流標的因子を単離する目的で、yeastを用いたyeast one-hybrid法によるスクリーニングを行った。3万クローンのスクリーニングの結果、複数の陽性クローンを得た。

为了阐明果蝇中神经胶质细胞分化的机制，分析了神经胶质细胞特异性转录因子回复蛋白的转录调节。荧光素酶测定表明，回购蛋白通过促进转录来调节下游靶因素。此外，创建了转基因蝇，并以酵母转录因子GAL4上游的识别序列（UA）（UAS）产生，并与一条线在所有神经细胞中表达GAL4的线，以分类表达回购基因产物。结果，观察到了表达细胞的异位M84（神经胶质细胞特异性增强子陷阱系）。此外，免疫组织化学染色显示长轴突段和异常运动神经奔跑的显着破裂。此外，由于异位表达中线细胞中的回旋基因产物，我们观察到长轴突片中的撕裂。此外，使用酵母单杂交法使用酵母进行筛查，以隔离下游目标因素。筛选30,000个克隆会导致多个阳性克隆。

项目成果

Matsuno,K.ら: "Frontiers of Neural Development Springer-Verlag Tokyo" Physical and functional links between Deltex and Notch receptor in Drosophila melanogaster.(印刷中), (1998)

Matsuno, K. 等人：“神经发育前沿 Springer-Verlag Tokyo”果蝇 Deltex 和 Notch 受体之间的物理和功能联系（印刷中），（1998 年）。

Pincus,D.W.ら: "FGF2/BDNF-responsive neuronal progenitor cells in the adult human subependyma." Annals of Neurology. (印刷中). (1998)

Pincus, D.W. 等人：“成人室管膜下的 FGF2/BDNF 反应神经元祖细胞”（Annals of Neurology）（1998 年出版）。

Kume,S.ら: "Role of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor in ventral signaling in Xenopus embryos." Science. 278. 1940-1943 (1997)

Kume, S. 等人：“肌醇 1,4,5-三磷酸受体在非洲爪蟾胚胎腹侧信号传导中的作用。科学”278。1940-1943 (1997)

Sakakibara,S.ら: "Expression of neural RNA-binding proteins in the post-natal CNS : implication of their roles in neural and glial cells development." J.Neurosci.17. 8300-8312 (1997)

Sakakibara, S. 等人：“出生后 CNS 中神经 RNA 结合蛋白的表达：它们在神经和神经胶质细胞发育中的作用。J.Neurosci.17 (1997)”

Konishi,Y.ら: "Demonstration of an E-box and its CNS-related binding factors for transcriptional regulation of the mouse type1 inositol 1,4,5-triphosphate receptor gene." J.Neurochem.69. 476-484 (1997)

Konishi, Y. 等人：“E-box 及其 CNS 相关结合因子对小鼠 1 型肌醇 1,4,5-三磷酸受体基因转录调节的演示。J.Neurochem.69。” (1997)