神経系におけるグリア細胞の機能の分子遺伝学的解析

神经系统胶质细胞功能的分子遗传学分析

• 批准号: 10155215
• 负责人: 岡野 栄之
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10155215/
• 关键词: ショウジョウバエ; グリア細胞; 分化; 転写因子; REPO; ホメオドメイン; yeast one-hybrid法

ショウジョウバエにおけるグリア細胞の分化決定機構を明らかにすることを目的として、グリア細胞特異的転写因子Repo蛋白質の転写制御について解析を行った。ショウジョウバエにおけるRepo蛋白質はその発現様式と1次構造の解析によりグリア細胞特異的な転写制御因子として考えられている。我々はRepoの転写制御能を調べる目的で次のような実験を行った。1)Repoのさまざまな領域を欠失した蛋白をCOS7細胞内に発現させ、免疫蛍光法により細胞内での分布を調べた結果、少なくとも303-393アミノ酸内に核移行シグナルが存在することが明らかとなった。2)S2細胞にてRepoのさまざまな領域を欠失した蛋白を用いルシフェラーゼアッセイを行った結果、124-219アミノ酸が含まれている場合に著しい活性の増加が認められた。3)すでにin vitroで結合することが知られている配列を含むゲノム断片を備えたレポーターを用いルシフェラーゼアッセイを行った結果、全長の蛋白を発現させたときには活性の増加が認められたが、ホメオドメインのみが欠失した蛋白ではほとんど活性が認められなかった。これらの結果から、Repoはホメオドメインを介し下流標的因子の転写を促進的に調節していることが明らかとなった。また、in vivoにおいても、全てのニューロブラストにてrepo遺伝子産物を異所的発現させたとき、異所的なM84(グリア細胞特異的なエンハンサー・トラップ系統)発現細胞数の増加が認められた。さらにより直接的に下流標的因子を単離する目的で、yeastを用いたyeast one-hybrid法によるスクリーニングを行った結果、複数の陽性クローンを得ており、部分的な塩基配列の決定の結果、in vitroの系によりREPO蛋白質が結合することが知られている配列を有していた。

シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ に お け る グ リ ア cells の decision institutions を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て, グ リ ア cell specific planning write factor Repo protein の planning write suppression に つ い analytical line を っ て た. シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ に お け る Repo protein は そ の 発 presently others と once の in structure parsing に よ り グ リ ア cell specific な planning write suppression factor と し て exam え ら れ て い る. I 々 々 Repo 転 転 write the production ability を volume べる purpose で times <s:1> ような actual experience を line った. 1) Repo の さ ま ざ ま を owe な field loss し た protein を COS7 cell に 発 now さ せ, immune 蛍 light に よ り intracellular で の distribution を adjustable べ た results, less な く と も 303-393 ア ミ ノ acid に nuclear migration within シ グ ナ ル が exist す る こ と が Ming ら か と な っ た. 2) S2 cells に て Repo の さ ま ざ ま を owe な field loss し た protein を with い ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ を line っ た results, 124-219 ア ミ が ノ acid containing ま れ て い に る occasions the し い active の raised plus が recognize め ら れ た. 3)すでにin Vitro で combining す る こ と が know ら れ て い る match column を containing む ゲ ノ ム fragment を prepared え た レ ポ ー タ ー を with い ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ を line っ た results, span の protein を 発 now さ せ た と き に は active の raised plus が recognize め ら れ た が, ホ メ オ ド メ イ ン の み が owe lost し た protein で は ほ と ん が ど activity recognition め ら れ な か っ た . こ れ ら の results か ら, Repo は ホ メ オ ド メ イ ン を interface し dirty mark factor の planning write を promote に adjust し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, the in vivo に お い て も, whole て の ニ ュ ー ロ ブ ラ ス ト に て repo heritage 伝 zi chan content を 発 now by different さ せ た と き, by different な M84 (グ リ ア cell specific な エ ン ハ ン サ ー · ト ラ ッ プ system) 発 now cell number の raised が recognize め ら れ た. さ ら に よ り に dirty mark factor directly を 単 from す る purpose で, yeast を with い た yeast one hybrid method に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た positive results, the plural の ク ロ ー ン を have て お り, part な salt base with column の decided の results, in Vitro の is に よ り REPO protein が combining す る こ と が know ら れ て い る match column を have し て い た.

项目成果

Sawamoto,K., Okano,H.ら: "Argos induces programmed cell death in the developing Drosophila eye by inhibition of the Ras pathway." Cell Deathe and Differentiation. 5. 262-270 (1998)

Sawamoto, K., Okano, H. 等人：“Argos 通过抑制 Ras 途径诱导发育中的果蝇眼睛中的程序性细胞死亡。” 5. 262-270 (1998)

Okano,H., Kaneko,Y.ら: "The regulatory mechanisms of neural development : roles of cell-autonomous and non cell-autonomous cues oncell fate decisions." Springer-Verlag社, 544 (1999)

Okano, H., Kaneko, Y. 等人：“神经发育的调节机制：细胞自主和非细胞自主线索对细胞命运决定的作用。Springer-Verlag，544 (1999)”

Pincus,D.W., Okano,H.ら: "FGF2/BDNF-responsive neuronal progenitor cells in the adult human subependyma." Annals of Neurology. 43. 576-585 (1998)

Pincus, D.W., Okano, H. 等人：“成人室管膜下的 FGF2/BDNF 反应神经元祖细胞。” 神经学年鉴 43. 576-585 (1998)

Yoshihara,Y., Okano,H.ら: "Multi-synaptic neural pathways visualized with plant lectin transgenes." Neuron. 1. 33-41 (1999)

Yoshihara, Y., Okano, H. 等人：“用植物凝集素转基因可视化多突触神经通路。” 1. 33-41 (1999)

Umemori,H., Okano,H.ら: "Stimulation of myelin basic protein gene transcription by Fyn tyrosine kinase for myelination." J.Neurosci.19. 1393-1397 (1999)

Umemori, H., Okano, H. 等人：“Fyn 酪氨酸激酶刺激髓磷脂碱性蛋白基因转录以促进髓鞘形成。”J.Neurosci.1393-1397 (1999)。