ダイオキシンの生体影響に対する化学物質の修飾効果の検討

化学物质对二恶英生物效应的修饰效果检验

• 批准号: 13027205
• 负责人: 宮入 伸一
• 金额: $ 6.85万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13027205/
• 关键词: 環境化学物質; チトクロームP-450; 毒性軽減; ダイオキシン; EROD活性; 修飾作用; チトクロームP-450酵素活性; ヒト培養細胞; 連続測定; 細胞生存率; エストロゲン生合成; 内分泌攪乱物質; 酵素阻害活性; 反応速度論的解析

近年、環境中に放出された2,3,7,8-四塩化ジベンゾ-p-ダイオキシン(TCDD)の生体影響が強く懸念されており、さらに複合汚染下では他の化学物質との相互作用による生体影響作用の修飾も考えられている。そこで、ヒト培養細胞を用いた簡便で精度の高いスクリーニング法を検討し、TCDDの細胞に対する作用に影響(干渉)する物質の検索を行った。TCDDの生体影響は、アリルハイドロカーボン受容体が媒介して誘導されるチトクロームP450_<1A1>(CYP1A1)に基づくエトキシレゾルフィンO-脱エチル化酵素(EROD)活性を指標として評価した。また、細胞生存率の判定は昨年度検討した培養ウェルに生着した細胞由来のタンパク質の量を基礎とする比色法を用いた。なお、ヒト培養細胞として、肝がん由来のHepG2細胞および乳がん由来のT47D細胞を用いた。まず、36種の環境汚染に関わる化学物質について単独での効果を検討した。従来報告されている様にTCDDや多環式芳香族化合物はEROD活性を上昇させた。一方、亜ヒ酸ナトリウム(NaAsO_2)やエチニルエストラジオール(EE_2)はベイサルレベルのEROD活性を抑制した。そこで、TCDDにより誘導されたEROD活性に対するこれら抑制効果を示した化合物の効果を検討した。その結果、いずれの化合物もTCDDにより誘導されたEROD活性を濃度依存的に抑制することが判明した。なお、NaAsO_2の抑制効果は両細胞間で差異は観察されなかったが、EE_2の抑制効果はHepG2細胞に比べてT47D細胞により顕著に観察された。また、NaAsO_2処理時におけるCYP1A1mRNA量を検討したところ、EROD活性の抑制とよく相関するmRNA量の減少が観察され、NaAsO_2の作用は転写の抑制であることが明らかになった。

In recent years, the biological impact of TCDD (2,3,7,8-tetrachloride) has been released into the environment. The suspense is the interaction of chemical substances and the influence of biological substances on the body under the compound pollution of the compound pollution. How to use simple and precise methods to culture cells using そこで and ヒトし, TCDD's effect on cells and their effects (interference) and the action of substances on substances. TCDD's biological influence, アリルハイドロカーボンReceiver, medium and induction, P450_<1A1 >(CYP1A1) EROD activity indicator and EROD activity index.また、Judgment of cell survival rate は Last year's research on culture ウェルに生したCell origin のタンパクquality のquantityをBasic とするcolorimetric method いた.なお, ヒト cultured cells として, liver がんのHepG2 cells およびがんのT47D cells をいた.まず, 36 kinds of environmental pollution, chemical substances, and chemical substances. Here we report that the EROD activity of polycyclic aromatic compounds such as TCDD and TCDD has increased. On the one hand, NaAsO_2 NaAsO_2 NaAsO_2 NaAsO_2 EROD inhibitor inhibits EROD activity. TCDD and TCDD induce EROD activity and inhibit the activity of TCDD compounds. As a result, it was found that the compound TCDD induced EROD activity in a concentration-dependent manner and inhibited it in a concentration-dependent manner.なお、NaAsO_2's inhibitory effect は両The difference between cells is observed されなかったが、EE The inhibitory effect of _2 was better in HepG2 cells than in T47D cells.また、NaAsO_2 treatment, the amount of CYP1A1mRNA was reduced, and the inhibition of EROD activity was reduced. It is related to the reduction of the amount of mRNA and the inhibition of the effect of NaAsO_2.

项目成果

Y.Yoshida, Y.Ohiwa, M.Shimamura, T.Izumi, S.Yoshida, K.Takahashi, S.Miyairi, M.Makimura, A.Naganuma: "Optimum conditions for derivatization of cysteine and cysteinylglycine in human plasma with ammonium 7-fluorobenzo-2-oxa-1,3-diazole-4-sulfonate for accu

Y.Yoshida、Y.Ohiwa、M.Shimamura、T.Izumi、S.Yoshida、K.Takahashi、S.Miyairi、M.Makimura、A.Naganuma：“用铵衍生化人血浆中半胱氨酸和半胱氨酰甘氨酸的最佳条件

J.Sekizawa, S.Miyairi, M.Ema: "Possible modification of dioxin risk in the presence of endogeneous ligands for arylhydrocarbon receptor."Organohalogen Compounds. 65. 325-328 (2003)

J.Sekizawa、S.Miyairi、M.Ema：“在存在芳基烃受体内源配体的情况下，可能会改变二恶英风险。”有机卤素化合物。

Y.Takao, K.Yamashita, S.Kohra, M.Inudo, M.Nagase, N.Tominaga, Y.Ishibashi, J.Sekizawa, S.Miyairi, K.Arizono: "High sensitivity analysis of indirubin by silylation using GC/MS"Journal of Health Science. 49・1. 88-90 (2003)

Y.Takao、K.Yamashita、S.Kohra、M.Inudo、M.Nagase、N.Tominaga、Y.Ishibashi、J.Sekizawa、S.Miyairi、K.Arizono：“使用 GC 进行硅烷化对靛玉红进行高灵敏度分析/MS“健康科学杂志。49・1.88-90（2003）

Y.Takao, K.Yamashita, S.Kohra, M.Inudo, M.Nagase, N.Tominaga, Y.Ishibashi, J.Sekizawa, S.Miyairi, K.Arizono: "High sensitivity analysis of indirubin by silylation using GC/MS."Journal of Health Sciences. 49・1. 88-90 (2003)

Y.Takao、K.Yamashita、S.Kohra、M.Inudo、M.Nagase、N.Tominaga、Y.Ishibashi、J.Sekizawa、S.Miyairi、K.Arizono：“使用 GC 进行硅烷化对靛玉红进行高灵敏度分析/MS.《健康科学杂志》. 49・1. 88-90 (2003)

T.Takabatake, H.Ito, A.Takei, M.Miyazawa, M.Hasegawa, S.Miyairi: "Benzofuroxan proceeds not in, but on Zeolite."Heterocycles. 60・3. 537-550 (2003)

T.Takabatake、H.Ito、A.Takei、M.Miyazawa、M.Hasekawa、S.Miyairi：“Benzofuroxan 不是在沸石中进行，而是在沸石上进行。”杂环 60・3 (2003)。