重差分化法による減数分裂特異的遺伝子の包括的単離と機能解析

利用多重差异分化方法全面分离减数分裂特异性基因并进行功能分析

• 批准号: 10160211
• 负责人: 野島 博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160211/
• 关键词: cDNAライブラリー; サブトラクション; ノーザンブロット; 窒素枯渇; 減数分裂; 転写誘導; 分裂酵母; 遺伝子破壊

これまでに新たに見出した分裂酵母で減数分裂特異的に転写誘導される遺伝子群(meu)のうち、meu13が興味深い性質を示したので詳しく解析した。meu13^+遺伝子は進化的に保存されたタンパク質をコードし、出芽酵母Hop2、ヒトGT198、マウスTBPIPとそれぞれ25%,29%,27%の相同性を示す。meu13遺伝子破壊株で減数分裂を誘導すると異常な胞子が形成された。マウスTBPIPのmRNAの発現プロフィールをノーザン解析により調べたところ、減数分裂を開始する生後17日以降から精巣でのみ発現し、精子形成不全の精巣では発現していなかった。この結果は、酵母から哺乳動物まで共通する減数分裂の過程へのMeu13の関与を示唆する。mesl欠失を組み合わせることにより減数第一分裂で停止させたところ、mesl欠失単独では見られない不均等な核分裂及び相同染色体の不分離が観蘂された。さらにmeu13遺伝子破壊株では交差による組み換えの頻度が野生型の118に減少し、ade6-M26組み換えホットスポットでの遺伝子変換の頻度も野生型の1l4に減少していた。この結果はMeu13が減数分裂前期の相同組み換えに必要とされていることを示しており、meu13遺伝子破壊株で見られる胞子形成異常や染色体分配異常は、組み換えの異常に由来することが示唆された。出芽酵母のHop2よりの類推がらMeul3が相同染色体間の対合促進機能を持つ可能性を検討した。FISH法を用いて減数分裂前期のホースティル核での相同染色体の位置関係を観察したところ、meu13遺伝子破壊株ではアーム部位での相同染色体の近接が野生型に比べて有意に低下していることを見出した。この結果はMeul3が減数分裂期に相同染色体の近接を促進する因子であることを示す。

Out new た こ れ ま で に に し た division specific yeast で meiosis に planning write induced さ れ る heritage 伝 subgroup (meu) の う ち, meu13 が tumblers deep い nature を shown し た の で detailed し く parsing し た. Meu13 ^ + posthumous son 伝 は evolutionary に save さ れ た タ ン パ ク qualitative を コ ー ド し, budding yeast Hop2, ヒ ト GT198, マ ウ ス TBPIP と そ れ ぞ れ 25%, 29%, 27% の identity を す. meu13 remnant 伝 substrain 壊 meiosis を induces すると abnormal な spore が formation された. マ ウ ス TBPIP の mRNA の 発 now プ ロ フ ィ ー ル を ノ ー ザ ン parsing に よ り adjustable べ た と こ ろ を began, meiosis す る born after 17 onwards か ら fine 巣 で の み 発 し now, incomplete spermatogenesis の fine 巣 で は 発 now し て い な か っ た. The <s:1> results of <s:1>, yeast ら and mammalian まで share the common する meiosis <s:1> process へ <s:1> Meu13 <e:1> and are related to を and suggest する. Mesl owe lost を group み close わ せ る こ と に よ り reduction first division で stop さ せ た と こ ろ, loss mesl owe 単 alone で は see ら れ な い unequal な fission and び same chromosome の nondisjunction が 観 蘂 さ れ た. さ ら に meu13 heritage 伝 son broken 壊 strains で は job に よ み る group in え の frequency が wild-type の 118 に reduce し, ade6 - み M26 group in え ホ ッ ト ス ポ ッ ト で の heritage 伝 son - in の frequency も wild-type の 1 l4 に reduce し て い た. こ の results は Meu13 が meiotic prophase の み in same group え に necessary と さ れ て い る こ と を shown し て お り, Meu13 heritage 伝 son see broken 壊 strains で ら れ る spore は, group forming abnormal distribution of abnormal や chromosome み in え の abnormal に origin す る こ と が in stopping さ れ た. Germinating yeast <s:1> Hop2よ が がら analogy がらMeul3が the <s:1> pair between the same chromosomes promotes the function を holds the <s:1> possibility を検 to seek the た た. を FISH method with い て meiotic prophase の ホ ー ス テ ィ ル nuclear で の same chromosome masato is の position を 観 examine し た と こ ろ, meu13 but 伝 broken 壊 strains で は ア ー ム parts で の の nearly the same chromosomes by が wild-type に than べ て deliberately low に し て い る こ と を shows し た. The <s:1> <s:1> result of <s:1> Meul3が meiotic phase に identical chromosome <e:1> proximity を promoting する factor である とを とを とを とを shows す.

项目成果

Ito, A., et al.: "Granzyme B is a transcriptional target of MITF in murine mast cells." Blood. 91. 3210-3221 (1998)

Ito, A. 等人：“颗粒酶 B 是小鼠肥大细胞中 MITF 的转录靶标。”

Kobori M., et al.: "Large scale isolation of osteoclast-specific genes by an improved method involving the preparation of a subtracted cDNA library." Genes to Cells. 3. 459-475 (1998)

Kobori M. 等人：“通过一种改进的方法大规模分离破骨细胞特异性基因，包括制备消减 cDNA 文库。”

Fujii, T., et al.: "Sperizin is a murine RING zinc finger protein specifically expressed-in haploid germ cells." Genomics. in press.

Fujii, T., et al.：“Sperizin 是一种鼠类 RING 锌指蛋白，在单倍体生殖细胞中特异性表达。”