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真核生物におけるDNA複製複合体の分子構築と機能解析

真核生物におけるDNA複製複合体の分子構築と機能解析
真核生物 DNA 复制复合物的分子构建和功能分析
批准号：
11143208
负责人：
野島 博
金额：
$1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11143208/
关键词：
Rfc3DNA傷害チェックポイントDNA複製開始Mcm蛋白質ネガティブ染色E2FNik1

项目摘要

项目成果

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昨年と同様に以下の4つの方向から研究を進めてきた。(a)分裂酵母のRfc3:免沈・ウエスタンブロット解析により調べたところ、Rfc3とRad17がin vivoで結合していることを証明した。野生株ではDNA傷害チェックポイントを制御する下流の蛋白質キナーゼであるChk1は紫外線、ガンマ線、MMS処理によりリン酸化されてポリアクリルアミド電気泳動による泳動度度が上側に移動するが、rfc3-1変異株ではこの移動が観察されない、すなわちChk1はリン酸化を受けないことを見い出した。(b)哺乳動物細胞E2FのS期開始制御機構:ヒトMCM5,MCM6遺伝子の5'上流をクローニングして幾つかのE2Fモチーフを見いだしたので、これら遺伝子がG1/S期で劇的に転写誘導される仕組みを解析した。この結果、MCM遺伝子の転写誘導は主としてE2F1により決定されていることを証明した。(c)哺乳動物のMCM/P1蛋白質:ヒトのMcm4,-6,-7がヘキサマーを構成してリング構造を持つことをネガティブ染色により観察した。またMcm2,-4,-6,-7ではサイズの小さいより明瞭なリング構造を持つことをロータリー・シャドウイング法により示した。(d)出芽酵母のNik1のS期開始制御:FLAG tagを付けたClb5サイクリンを作製し、このFLAG-Clb5に依存するカイネース活性をヒストンH1を基質に用いて測定した。この時、Swe1を高発現させた酵母抽出液でFLAG-Clb5免疫沈降物を前処理すると、H1のリン酸化が大幅に抑えられることがわかった。この結果は、Nik1がS期CDKの活性調節を通して、DNA複製の調節機構に参加している可能性を示している。
期刊论文(6)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Iguchi N.et al.: "Molecular cloning of haploid germ cell-specific tektin cDNA and analysis of the protein in mouse testis"FEBS Lett.. 456. 315-321 (1999)
Iguchi N.等人：“单倍体生殖细胞特异性 tektin cDNA 的分子克隆和小鼠睾丸中蛋白质的分析”FEBS Lett.. 456. 315-321 (1999)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tanaka H.et al.: "A haploid germ cell-specific nuclear protein kinase (Haspin) in spermatide nuclei. : its identification,charachterization and effects on somatic cells"J. Biol. Chem.. 274. 17049-17057 (1999)
Tanaka H.et al.：“精子细胞核中的单倍体生殖细胞特异性核蛋白激酶（Haspin）。：其鉴定、表征及其对体细胞的影响”J。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Fujii T.et al.: "Sperizin is a murine RING zinc finger protein specifically expressed in haploid germ cells"Genomics. 57. 94-101 (1999)
Fujii T.等人：“Sperizin 是一种在单倍体生殖细胞中特异性表达的鼠类 RING 锌指蛋白”Genomics。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Shimada M.et al.: "Rfc3 of S. pombe,a small subunit of replication factor C complex,is required for both damage and replication checkpoints"Mol. Biol. Cell.. 10. 3991-4003 (1999)
Shimada M.等人：“粟酒裂殖酵母的 Rfc3 是复制因子 C 复合体的一个小亚基，是损伤和复制检查点所必需的”Mol.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    段階的サブストラクション法による自己免疫疾患原因遺伝子の探索と検証
    • 批准号：
      17019045
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $2.56万
    • 财政年份：
      2005
    • 负责人：
      野島 博
    • 依托单位：
      Osaka University
    翻訳フレームを持たない新規なポリAプラスRNA群の機能解析
    • 批准号：
      15030227
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $4.1万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      野島 博
    • 依托单位：
      Osaka University
    新しい発想にもとづくRNA血液診断システムの構築
    • 批准号：
      16651101
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.24万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      野島 博
    • 依托单位：
      Osaka University
    分裂酵母の減数分裂システム解明に向けたゲノム生物学的研究
    • 批准号：
      16013226
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $4.03万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      野島 博
    • 依托单位：
      Osaka University