TLR発現に影響を与える新規因子?CFTR遺伝子変異と分子シャペロン?

影响TLR表达的新因素？CFTR基因突变和分子伴侣？

• 批准号: 14021095
• 负责人: 甲斐 広文
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021095/
• 关键词: 自然免疫; Toll-like receptor (TLR); 小胞体品質管理機構; 分子シャペロン; 遺伝性疾患; 嚢胞性繊維症(CF); calnexin; calreticulin

1.CF病態時のTLR2の発現上昇CF病態時にTLR2遺伝子の発現上昇が起こっているか否かを半定量的RT-PCR法を用いて検討した.その結果,健常人由来の16HBE14o-細胞に比べ,CF患者由来の細胞CFBE41o-細胞におけるTLR2の発現が高いことが明らかになった.次に,CFBE41o-細胞にTLR2のリガンドであるpeptidoglycan (PGN)を処理したところ,NF-κBの核内移行及び活性化が観察されたことから,CFBE41o-細胞には,機能的なTLR2が発現していることが確認できた.16HBE14o-細胞におけるCFTR機能を阻害するためにglybenclamide (GC)を処理した.その結果,GC処理により,16HBE14o-細胞におけるTLR2 mRNAの発現が上昇した.一方,機能的なCFTRの発現していないCFBE41o-細胞においては,GCによるTLR2 mRNAの発現上昇は起こらなかったことから,GCの作用はCFTR-dependentであることが示唆された.2.TLRのプロセッシングとERシャペロンまず,TLR4-WTおよびTLR4-299/399(細胞膜上に発現しないTLR4の変異体)のGFP融合タンパク発現ベクターの作製を行った.次に,TLR4のプロセッシングに関与しているER分子シャペロンを同定するために,それぞれ膜貫通型及び遊離型ERシャペロンであるCalnexin及びCalreticulinのアデノウイルス発現ベクターの構築を行った.Calnexin・CalreticulinはN型糖鎖を認識するレクチンタンパクであり,TLRの細胞内プロセッシングに十分関与している可能性がある.今後はTLRのプロセッシングに,これらの分子がどのように関与しているかを,上述したツールを用いて検討していく予定である.

1. The expression of TLR2 increased in CF pathologies. The expression of TLR2 increased in CF pathologies. As a result, the expression of TLR2 was significantly higher in 16HBE14o-cells derived from healthy people than in CFBE41o-cells derived from CF patients. Furthermore, the intracellular migration and activation of NF-κB in CFBE 41o-cells were observed after treatment with peptidoglycan (PGN). The functional expression of TLR 2 in CFBE 41o-cells was confirmed after treatment with glybenzamide (GC). As a result, TLR2 mRNA expression increased in 16HBE14 o-cells treated with GC. On the one hand, functional CFTR gene expression increased in CFBE41 o-cells, while GC gene expression increased in CFTR-dependent cells. 2. TLR gene expression increased in CFTR-dependent cells, and GC gene expression increased in CFTR-dependent cells. 2. TLR gene expression increased in CFTR-dependent cells, and TLR4-WT gene expression increased in CFBE 41 o-cells. In addition, the TLR4 gene expression is related to the ER molecule expression in the same way, both membrane-penetrating and free-type ER molecules are related to the construction of Calnexin and Calretinin. Calnexin and Calretinin are related to the recognition of N-type glycopole, and the intracellular expression of TLR is related to the possibility of transformation. In the future, TLR will not be able to change its position, and the molecules will not be able to change their position.

项目成果

Jono H.: "TGF-β-Smad signaling pathway cooperates with NF-κB to mediate nontypeable Haemophilus influenzae-induced MUC2 mucin transcription"J Biol Chem. 277(47). 45547-45557 (2002)

Jono H.：“TGF-β-Smad 信号通路与 NF-κB 协同介导不可分型流感嗜血杆菌诱导的 MUC2 粘蛋白转录”J Biol Chem 277(47)。

Imasato A.: "Inhibition of p38 MAPK by glucocorticoids via induction of MAP kinase phosphatase-1 enhance nontypeable Haemophilus influenzae-induced expression of toll-like receptor 2."J Biol Chem.. 277(49). 47444-47450 (2002)

Imasato A.：“糖皮质激素通过诱导 MAP 激酶磷酸酶 1 抑制 p38 MAPK，增强不可分型流感嗜血杆菌诱导的 Toll 样受体 2 的表达。”J Biol Chem.. 277(49)。

Okiyoneda T.: "Calnexin Delta 185-520 partially reverses the misprocessing of the Delta F508 cystic fibrosis transmembrane conductance regulator"FEBS Letters. 526. 87-92 (2002)

Okiyoneda T.：“Calnexin Delta 185-520 部分逆转了 Delta F508 囊性纤维化跨膜电导调节器的错误处理”FEBS Letters。

Shuto T.: "Glucocorticoids synergistically enhance nontypeable Haemophilus influenzae-induced Toll-like receptor 2 expression via a negative cross-talk with p38 MAP kinase"J Biol Chem. 277(19). 17263-17270 (2002)

Shuto T.：“糖皮质激素通过与 p38 MAP 激酶的负串扰协同增强不可分型流感嗜血杆菌诱导的 Toll 样受体 2 表达”J Biol Chem。