変異CFTRの小胞体からの輸送障害機構の解明とエスコート分子の治療への応用

阐明内质网突变型 CFTR 转运受损的机制以及护航分子的治疗应用

基本信息

批准号：
15032245
负责人：
甲斐広文
金额：
$ 5.31万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.CFTRのER export機構の検討GFP-CFTRを恒常的に発現するBHK細胞を用いて,CFTRのER export機構およびその輸送経路について免疫蛍光染色法にて検討を行った.その結果,CFTRのER exportはCOPII依存的であること,さらに,CFTRの小胞体からの輸送経路は通常とは異なるendosomeを介した経路である可能性を見いだした.本知見は,CFTR特異的な輸送経路の存在を示唆するものであり,CFTR特異的に輸送を制御できる可能性を示唆する重要な知見である(T.Okiyoneda et al.,J Pharmacol Sci 2004).2.ΔF508 CFTRのmislocalization(ER retention)を改善する artifical escortタンパク質の分子設計ΔF508 CFTRと結合し,そのmislocalizadonへの関与が示唆されている小胞体分子シャペロンCalnexinに着目し,Calnexinを鋳型にして様々なartificalタンパク質を構築した.現在までに,Golgi体へ局在変化するCalnexin変異体などを見いだしており,今後,ΔF508 CFTRに対する影響について検討を行う予定である.3.CalreticulinによるCFTR down-regulationの機構解明様々の細胞生物学的検討の結果,CalreticulinはCFTRのGolgi体から形質膜への輸送を阻害することにより,CFTR発現を負に制御することを見いだした.また,阻害剤を用いた検討の結果,Calreitculinはpost-GolgiにおいてCFTRのproteasomal degradationを促進する可能性を見いだした.

1。使用构成表达GFP-CFTR的BHK细胞对CFTR的ER输出机制进行检查，使用免疫荧光染色研究了CFTR的ER输出机制及其传输路径。结果，我们发现CFTR的ER导出取决于COPII，并且内质网的CFTR的传输路径可能是不同的内体介导的途径。这一发现表明存在CFTR特异性的运输路径，这是一个重要的发现，即可能专门调节运输（T. Okiyoneda等，J Pharmacol Sci 2004）.2。 ΔF508改善了伴随蛋白的CFTR分子设计的错误定位（ER保留），我们专注于内胞质网状网状伴侣clnexin，它与ΔF508CFTR结合，并建议其参与错误的氯局核酸酶，并使用Calnexins a demptelpe构建了各种艺术蛋白。迄今为止，我们已经发现了钙化性突变体，这些突变体位于高尔基体中，我们计划将来研究对ΔF508CFTR的影响。 3。在各种细胞生物学研究之后阐明CFTR下调的机制，我们发现钙网蛋白通过抑制CFTR从高尔基体到质膜的CFTR转运而对CFTR的表达进行负调节。此外，由于使用抑制剂进行了研究，钙环蛋白表明，钙蛋白酶曲霉蛋白负责调节后高尔基体中的CFTR表达。他们发现有可能促进退化。