新規のWntシグナル伝達分子による形態形成の制御機構の解析

新型Wnt信号分子形态发生控制机制分析

• 批准号: 14034239
• 负责人: 岸田 昭世
• 金额: $ 4.22万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14034239/
• 关键词: Wnt-3a; Dvl; Rhoキナーゼ; PCP; 神経突起退縮; 形態形成; Axam; Wnt; Duplin; SUMO; 体軸形成

Wntシグナルは初期発生時の体軸形成や細胞の増殖や分化などを制御する。Wntシグナルは細胞内でβ-カテニン経路とPCP(平面内細胞極性)経路、Ca^<2+>経路の3つに分岐する。DvlはWntシグナルをβ-カテニン経路とPCP経路に分岐点に当たる分子で、GSK-3βによるβ-カテニンのリン酸化と分解を抑制する一方、ショウジョウバエでの解析から、PCP経路によってJunキナーゼやRhoキナーゼを介して形態形成を制御することが見出されつつあるが、神経系細胞におけるPCP経路の作用は明らかでなかった。そこで今年度は、哺乳動物細胞におけるWntやDvl、Rhoキナーゼの作用を検討した。COS細胞において、Junキナーゼ活性化に必須のDEP領域を含まないDvl変異体がRhoキナーゼを活性化する事から、DvlはJunキナーゼとRhoキナーゼを異なった領域を介して活性化する可能性が示された.Wnt-1やWnt-3a、DvlによるRhoキナーゼの活性化はRhoキナーゼのRho結合ドメインを共発現することにより抑制されたことから、この活性化にはRhoが関与することが明らかとなった。Wnt-1やDvlを発現すると褐色細胞腫由来のPC12細胞でのNGF依存性の神経突起伸張や神経芽細胞腫由来N1E-115細胞での血清除去刺激による神経突起伸張が抑制されだが、この現象はRhoキナーゼ阻害剤により解除された。さらに、RhotekinのRho結合領域を用いたpull-down assayにより、Dvlを発現させたPC12細胞ではRhoが活性化することを見出した。高度に精製したWnt-3aでPC12細胞を処理することによりRhoキナーゼの活性化が認められた。したがって、Wnt-3aやDvlのシグナルは哺乳動物の神経系細胞において、Rhoキナーゼを介して神経突起の伸張や退縮に関わる可能性が示唆された。

Wnt controls the body axis formation, proliferation and differentiation of cells during the initial stage of puberty. Wntシグナルは intracellular β-カテニン経路とPCP (in-plane cell polarity)経路, Ca^<2+>経路の3つに分岐する. DvlはWntシグナルをβ-カテニン経路 とPCP経路 divergence point にwhen たるmolecule で, GS K-3βによるβ-カテニンのリン acidification and decomposition inhibitionする一、ショウジョウバエでのsolver Analyzing the situationることが见出されつつあるが、神経 Line Cell におけるPCP経路の Effect は明らかでなかった.そこでthis yearは, mammalian cell におけるWntやDvl, Rho キナーゼの Effect を検した. COS Cell Activation, Jun キナーゼActivation Required にDEP Area をContaining まないDvl Allogeneic がRho キナーゼをActivation する事から、DvlはJunキナーゼとRhoキナーゼをdifferent なった区を Introduction してActivation するpossibilityされた.Wnt-1やWnt-3a、DvlによるRhoキナーゼのactivationはRhoキナーゼのRho bindingドされたことから、このActivationにはRhoが关与することが明らかとなった. Wnt-1 is the cause of brown cell swelling and NGF-dependent NGF dependence of PC12 cells. N1 E-115 cells remove the blood and stimulate the expansion of the nerve neurite protrusions, inhibit the expansion of the nerve ridges, and remove the obstruction and release of the phenomenon.さらに、RhotekinのRho binding field いたpull-down assayにより、Dvlを発appears させたPC12 cells ではRhoがactivation することを见出した. Highly refined Wnt-3a and PC12 cell processing and activation of Rho and Wnt-3a.したがって、Wnt-3aやDvlのシグナルはMammalian God 経 lineage cell において, Rho キナーゼを Introduction して神経 protrusion のstretch や retraction に Off わる possibility がshow instigation された.

项目成果

Oshita A.: "Identification and characterization of a novel Dvl-binding protein that suppresses Wnt signaling pathway"Genes Cells. 8・12. 1005-1017 (2003)

Oshita A.：“抑制 Wnt 信号通路的新型 Dvl 结合蛋白的鉴定和表征”Genes Cells 8·12 (2003)。

Nagano Y.: "Siah-1 facilitates ubiquitination and degradation of synphilin-1, and is involved in dopamine release and biosynthesis"J.Biol.Chem.. 278・58. 51504-51514 (2003)

Nagano Y.：“Siah-1促进synphilin-1的泛素化和降解，并参与多巴胺的释放和生物合成”J.Biol.Chem.. 278・58（2003）。

Kishida S.: "Wnt-3a and Dvl induce neurite retraction by activating Rho-associated kinase."Mol.Cell.Biol.. in press. (2004)

Kishida S.：“Wnt-3a 和 Dvl 通过激活 Rho 相关激酶诱导神经突收缩。”Mol.Cell.Biol.. 正在出版。

Oshiro, T.: "Interaction of POB1, a downstream molecule of small G protein Ral, with PAG2, a paxillin-binding protein, is involved in cell migration"J. Biol. Chem.. 277・41. 38618-38626 (2002)

Oshiro, T.：“小 G 蛋白 Ral 的下游分子 POB1 与桩蛋白结合蛋白 PAG2 的相互作用参与细胞迁移” J. Biol. 277・41 (2002) ）

Koyano, S.: "Synthesis and release of activin and noggin by cultured human amniotic epithelial cells"Dev. Growth. Differ.. 44・2. 103-112 (2002)

Koyano，S.：“培养的人羊膜上皮细胞的激活素和头蛋白的合成和释放”Dev.Growth.. 103-112 (2002)。