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自然免疫系の活性化におけるシャペロンの機能

伴侣在激活先天免疫系统中的功能

基本信息

批准号：
14037252
负责人：
牟田達史
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

自然免疫系を活性化することが近年報告されたシャペロンタンパク質の一種である熱ショックタンパク質(Hsp)60について、その構造機能相関を明らかにすることを目的に、以下の実験を行った。まず、Hsp60の野生型に加え、ATP結合部位、基質結合部位にそれぞれ変異をもつD111K、L283S変異体を作成し、大腸菌を用いた発現系を構築した。アミノ末端側に人為的に付加したHis-tagを用いて精製し、マクロファージの刺激活性についてNF-κB活性を指標に測定したところ、いずれの変異体を用いた場合にも刺激活性が検出された。大腸菌由来の何らかの自然免疫系活性化物質の微量混入の可能性が考えられたため、さらにイオン交換クロマトグラフィーによる精製を試みたが、同様に変異体においても活性が検出された。次に細菌由来の物質の混入の可能性を防ぐため、バキュロウイルスと昆虫細胞を用いた発現系を構築した。大腸菌の発現系の場合と同じく、付加したHis-tagによって精製した標品の活性を測定したところ、この系では、野生型Hsp60にもマクロファージ刺激活性は検出できなかった。これらの結果は、これまで報告されている組換えHsp60のもつ自然免疫系刺激活性は、発現に用いた大腸菌由来の物質に依存していた可能性を示唆している。一方、His-tagを含むHsp60はそのシャペロン活性発現に重要な14量体形成ができないといわれていることから、最近、tagを除去したネイティブなHsp60の昆虫細胞発現系を構築した。現在までに、細胞の粗抽出液を用いてマクロファージ刺激活性を測定したが、活性は検出されなかった。今後、さらにこの昆虫細胞で発現したHsp60を精製し、ATPase活性を確認しつつ、自然免疫系刺激活性について検討したい。また、同じく昆虫細胞発現系を構築したHsp70、90を用いて、細胞刺激活性について検討したい。

In recent years, the natural immune system has been activated. In recent years, it has been reported that there are no signs of failure in recent years. In the first place, the machine can show that the target of the vaccine is the same as that of the 60-year-old Hsp. The wild type of Hsp60 was added, the combination of ATP and base was made into D111K and L283S, and the bacteria were used to form the virus. At the end of the terminal, the artificial His-tag was used to stimulate the activity of the drug, the NF- κ B activity was used to determine the concentration of the drug, and the complex was used to stimulate the activity of the drug. The origin of the fungus, the active substance of the natural immune system, the possibility of micro-mixing with the active substance of the natural immune system, the possibility of micro-mixing with the active substance of the natural immune system, the possibility of micro-mixing with the active substance of the natural immune system. The bacteria of secondary origin are mixed with the possibility of prevention, prevention and treatment of insects. The results showed that the activity of the standard product was determined by the determination of the activity of wild type Hsp60 strain, wild type Hsp60 strain, wild type Hsp60 strain and wild type Hsp60 strain. The results of the study, the results of the report, the Hsp60 test, the stimulation activity of the natural immune system, and the possibility of the use of pathogenic bacteria indicate the possibility of instigation. On the one hand, the His-tag contains Hsp60 particles. It is important that 14 body weight is formed. Recently, the tag removes the insect cells of the Hsp60 insect cells. At present, the crude extract of the cell is used to determine the stimulation activity of the crude extract, and the activity of the crude extract is determined by the stimulation activity of the crude extract. In the future, the insect cells showed that there were Hsp60 sperm, ATPase activity, and natural immune system stimulation activity. The cells of insects of the same species are called Hsp70, and 90% of them are used to stimulate the activity of cells.