異物応答型プロテアーゼ前駆体の活性化機構

异物响应蛋白酶前体的激活机制

• 批准号: 08278223
• 负责人: 牟田 達史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08278223/
• 关键词: プロテアーゼ; 前駆体; 異物認識; 体液凝固; β-グルカン; カブトガニ; 真菌; 生体防御

Factor Gサブユニットα全体と、各ドメインについて組み替え体を調製し、その多糖結合活性について検討したところ、サブユニットα全体は(1→3)-β-D-glucan、あるいは(1→4)-β-D-xylanを固定したSepharoseに結合し、mannan-Sepharose及び対照のSepharoseには結合しなかった。一方、glucanse様ドメイン、xylanase A様ドメインは上記の4種のSepharoseいずれにも結合しなかったのに対し、xylanase Z様ドメインは(1→3)-β-D-glucan-Sepharoseに特異的に結合した。すなわち、サブユニットα内のC末端に存在するxylanase Z様の2回の繰り返しドメインがFactor Gの(1→3)-β-D-glucan結合部位であることが判明した。Factor Gは異なる遺伝子に由来する2つのサブユニットから構成されているので、血球中に両者が常に会合した状態で存在するのか、あるいは解離した分子種も存在するのかを明らかにするため、それぞれのサブユニットに特異的な抗体を用いてWestern blottingにより解析した。ヘモリンフプラズマ、血球抽出液、さらに血球より分離した大・小顆粒成分に対してWestern blottingを行った結果、サブユニットα、βはいずれも細胞内大顆粒に局在することが明らかになった。また、大顆粒成分中には抗サブユニットβ抗体と反応するサブユニットβとは異なる27kDaのタンパク質の存在が見い出され、このタンパク質を精製し、cDNA cloningを行い、構造決定したところ、proline cis-trans isomerase(PPIase)活性をもつサイクロフィリンB homologueであることが明らかになった。一方、血球抽出液をDextran Sulphate-Sepharose CL-6Bによって粗分画した画分を用いて同様の解析を行ったところ、Factor Gが含まれる0.25M Nacl溶出画分には、サブユニットα、β両者の存在が確認された。また、サブユニットαは、素通り画分にも検出された。この画分にはサブユニットβは検出されず、従ってサブユニットαが単独あるいは他のタンパク質と会合した状態で存在する可能性が示唆された。

The whole body of Factor G, the whole body of Sepharose, the binding activity of polysaccharides, the binding activity of polysaccharides, (1

项目成果

Muta,T.: "Progress in Molecular and Subcellular Biology 15 "Invertebrate Immunology,"" Springer-Verlag, 250 (1996)

Muta,T.：“分子和亚细胞生物学进展 15“无脊椎动物免疫学”，”Springer-Verlag，250（1996）

Muta,T.: "Intracellular Protein Catabolism" Plenum Press, 306 (1996)

Muta,T.：“细胞内蛋白质分解代谢”Plenum Press，306（1996）

Bergner,A.: "Horseshoe crab coagulogen in an invertebrate protein with a nerve growth factor-like domain" Hoppe Seyler J.(発表予定). (1997)

Bergner, A.：“具有神经生长因子样结构域的无脊椎动物蛋白中的鲎凝固原”Hoppe Seyler J.（即将出版）。

Muta,T: "The Role of Hemolymph Coagulation in innate Immunity" Current Opinion in Immunology. 8,(1). 41-48 (1996)

Muta,T：“血淋巴凝固在先天免疫中的作用”当前免疫学观点。

Bergner,A.: "Crystal Structure of Coagulogen,the Clotting Protein from Horseshoe Crab:A Structural Homologue to Nerve Growth Factor" EMBO Journal. 15,(24). 6789-6797 (1996)

Bergner,A.：“凝固蛋白原（来自鲎的凝血蛋白）的晶体结构：神经生长因子的结构同源物”EMBO 杂志。