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グラム陰性菌表層のリポ多糖(LPS)による単球・マクロファージの活性化機構

革兰氏阴性菌表面脂多糖（LPS）激活单核细胞和巨噬细胞的机制

基本信息

批准号：
10178211
负责人：
牟田達史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

単球・マクロファージ細胞膜上のCDl4はグラム陰性菌の外膜に存在するリポ多糖(LPS)を初め、peptidoglycanなどの他の感染菌由来の物質、さらにはアポトーシスを起こした自己の不要な細胞を認識し、細胞の活性化を仲介する“pattern recognition receptor"であり、異物認識の鍵を握る分子と言える。今回我々は、CD14を介した異物認識機構を分子レベルで解明するため、メタノール資化性酵母Pichia pastorisを用いた可溶型ヒトCD14の発現系を構築し、その精製を行った。まず、glycosylphosphatidylinositol(GPI)-anchor型膜結合シグナルとなる8アミノ酸を欠損したヒト可溶型CD14をコードするcDNAを、P.pastorisゲノム内のalcohol oxidase 1(AOX1)遺伝子プロモーターの下流に酸性フオスファターゼ(PHO1)の分泌シグナルとともに相同組み換えにより導入した。得られたtransformantをメタノールを唯一の炭素源として含む培地中で培養することにより発現誘導したところ、培養上清中に分子量55kDaと51kDaの可溶型CD14の発現が認められた。組み換え可溶型CDl4(_<rs>CD14)は、培養上清を硫安沈澱によって濃縮した後、イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。精製_<rs>CDl4とLPSの結合をnativc PAGEによるgel shift法で検討したところ、LPSの存在下で_<rs>CDl4の移動度が変化し、実際に複合体を形成することが確認された。今後、CD14のLPS結合における構造機能相関について解析するとともに、他の感染菌由来物質、アポトーシス細胞の認識における特異性について検討する予定である。

The outer membrane of the cell membrane contains CDl4 polysaccharides (LPS), peptidoglycan polysaccharides (EPS) and other bacteria that are infected by bacteria. They do not want to know about themselves, they do not want to be activated, they are activated, they are mediated, and they are activated. This time, we and CD14 have introduced the molecular science and technology of information technology and information technology. We have used the soluble CD14 system of yeast Pichia pastoris, which is a kind of soluble yeast, to provide information and information on the information technology of yeast. The membranes of glycosylphosphatidylinositol (GPI)-Anchorage type combined with alcohol oxidase (PHO1)-Anchorage membranes were loaded with soluble CD14, soluble CD14, CD14 The only carbon source, transformant, 51kDa, soluble CD14, molecular weight, soluble carbon source, molecular weight, molecular After the preparation of soluble CDl4 (_ & lt;rs>CD14) and thioamphenicol in the supernatant, the supernatant was treated with thioamphenicol and thioamphenicol. The precision _ & lt;rs>CDl4 LPS method is combined with the gel shift method to verify the mobility of the lt;rs>CDl4, and the complex of the lt;rs>CDl4 is formed to confirm the mobility of the lt;rs>CDl4. In the future, the combination of CD14 and LPS can be used to analyze the source of infection, the source of infection, and the source of infection.