シャペロン様ATPaseVCPの新規アダプター分子(SVIP)と空胞形成細胞死

类分子伴侣 ATP 酶 VCP 和空泡细胞死亡的新型接头分子 (SVIP)

基本信息

批准号：
14037265
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14037265/
关键词：
VCP p97 シャペロン小胞体

项目摘要

分子シャペロンの一種であるVCP(別名p97)は、オルガネラ膜形成や異常タンパク質の除去システムなどの多彩な細胞機能に関与しており、これらは異なるアダプター分子の介在によってなされると考えられている。私たちがVCPの新規結合タンパク質として同定したSVIP (small VCP-interacting protein)は、培養細胞内で過剰発現させると、ポリグルタミン病などの神経変性疾患において観察されるような細胞内空胞が形成される。SVIPの細胞内機能を解明するために以下の研究を行った。1、SVIPにより形成される細胞内空胞の解析:SVIPの過剰発現にともない細胞内に形成される巨大な空胞の形成機構を解明するために、HeLa細胞にSVIPを過剰発現させ、電子顕微鏡による解析を行った。その結果、空胞の外側にそってリボソームが分布している様子が観察された。また、金コロイドを用いた免疫電子顕微鏡観察の結果、空胞膜上には小胞体膜タンパク質であるチトクロムNADPH還元酵素が分布し、空胞膜の内側には小胞体内腔タンパク質であるBiPが分布していた。以上の結果から、これらの空胞は小胞体が肥大化してできたものであると結論された。最近、VCPが小胞体タンパク質の分解機構(ERAD)に関与している可能性が指摘されているが、SVIPの過剰発現によってERADが阻害され、小胞体の機能に異常が生じた可能性が考えられた。2、VCP-SVIP複合体の性質の解析:VCPには、これまでに2種類のアダプタータンパク質(p47,Ufd1)が同定されている。VCP-SVIP複合体と既知のアダプタータンパク質との関係を詳細に解析するために、精製タンパク質を用いて結合実験を行った。その結果、p47,Ufd1およびSVIPのVCPへの結合はお互いに競合的であり、結合部位を共有していることが明らかとなった。このことより、SVIPはp47,Ufd1に続くVCPの第三のアダプター分子である可能性が強く示唆された。

VCP（也称为p97）是一种分子伴侣，参与了多种细胞功能，例如细胞器膜的形成和用于去除异常蛋白质的系统，并被认为是通过不同的适配器分子的干预来完成的。 SVIP（小型VCP相互作用蛋白）在培养的细胞中过表达了我们已确定为一种新型结合蛋白，并形成细胞内液泡，例如在神经退行性疾病（如多谷氨酰胺疾病）中观察到的液泡。进行了以下研究以阐明SVIP的细胞内功能。 1。通过SVIP形成的细胞内液泡的分析：阐明由于SVIP过表达而形成的巨型液泡形成的机理，在HeLa细胞中过表达SVIP并通过电子显微镜分析。结果，观察到核糖体沿液泡的外部分布。此外，由于使用胶体金的免疫电子显微镜观察，细胞色素NADPH还原酶（一种内质网的蛋白质）分布在液泡膜上，而BIP（一种内质子网状的蛋白质）分布在液泡膜片内部。从以上结果得出结论，这些液泡是由内质网的扩大形成的。最近，有人指出，VCP可能参与内质网蛋白（ERAD）的降解机制，但人们认为SVIP的过表达抑制了ERAD，从而导致内质网的异常。 2。对VCP-SVIP复合物的性质的分析：已在VCP中鉴定出两种类型的衔接蛋白（P47，UFD1）。使用纯化的蛋白质进行结合实验，以详细分析VCP-SVIP复合物与已知衔接蛋白之间的关系。结果表明，P47，UFD1和SVIP与VCP的结合相互竞争，并共享一个结合位点。这强烈表明SVIP可能是P47，UFD1之后VCP的第三个适配器分子。