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小胞体t/Q-SNARE複合体の多様な役割の解明

阐明内质网 t/Q-SNARE 复合物的多种作用

基本信息

批准号：
18050036
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050036/
关键词：
Sintaxin18 NAG BNIP1 カーゴ受容体小胞体小胞輸送 Syntaxin18

项目摘要

SNAREは小胞輸送の膜融合に関与するタンパク質である。我々は、動物細胞の小胞体に存在するSNAREであるsyntaxin18 (Syn18)が、ZW10、 RINT-1、 BNIP1、 p31などと結合していることを見いだした。また、昨年度の研究でSyn18複合体の新たな成分としてNAG (Neuroblastoma Amplified Gene)タンパク質を同定した。本年度は以下の研究を行った。1)p31と相互作用するNAGの機能解析Syn18複合体中で、p31/RINT-1/ZW10はサブコンプレックスを形成している。このサブコンプレックス中にNAGが含まれることを明らかにした。また、p31のN末端6-11アミノ酸領域が直接NAGと結合していることを示唆する結果を得た。NAGをRNAi法でノックダウンしたところ、p31のタンパク質量が減少するということを見いだした。また、不思議なことに、NAGの発現抑制はゴルジ体の形態には変化を与えなかったが、リソソームやエンドソームの局在が少し変化した。現在、NAGの発現抑制によって、小胞体-ゴルジ体のタンパク質輸送が影響を受けるかどうかを調べている。2)BNIP1結合タンパク質の解析昨年度行ったTwo-hybridスクリーニングで、カーゴ受容体と考えられているp24ファミリーの一つであるp23が、BNIP1と相互作用することが示された。内在性のp23とBNIP1の結合を確認するために、p23の抗体を作製して免疫沈降を行ったが、内在性タンパク質同士の結合は認められなかった。現在、YFP-p23の安定発現株の作製を進めており、この細胞株が樹立できたら、BNIP1との相互作用についてさらに詳細に解析を進める予定である。3)ノックアウト細胞を用いたp31の解析p31ノックアウトマウスは胎生致死であり、この遺伝子は発生に必須である。Flox/Floxマウスから調製したMEFにAde-Creリコンビナーゼを感染させたところ、p31の減少に伴って小胞体が分断された。さらに時間が経過すると小胞体は巨大な空胞となり、同時に小胞体ストレス反応が誘起されてアポトーシスが起こることが判明した。研究協力者:青木健洋(東京薬科大学・生命科学研究科・博士後期課程院生)

SNARE is related to membrane fusion in cellular transport. In the presence of SNARE, syntaxin18 (Syn18), ZW10, RINT-1, BNIP1, p31, etc. The new component of Syn18 complex was identified by NAG (Neuroblastoma Amplified Gene). This year, the following research was conducted. 1) Functional analysis of NAG in p31-RINT-1/ZW10 complex. This is the first time that I've seen you. The N-terminal 6-11 of p31 was found to be a direct NAG binding site. NAG RNAi method is used to reduce the quality of p31. The development of NAG is not easy to understand, but it is easy to understand. Now, NAG production inhibition, small cell-to-cell mass transport is affected by the change in temperature. 2) Analysis of BNIP1 binding properties: Two-hybrid interaction, receptor interaction, and interaction. The binding of intrinsic p23 to BNIP1 was confirmed by immunosuppression and binding of intrinsic p23 to BNIP1. Now, YFP-p23 stable development of the plant production process, the establishment of this cell line, BNIP1 interaction between the process of detailed analysis of the future. 3) The p31 analysis of the cell is necessary for the development of the fetus. Flox/Flox modulation is the most important factor in the development of cellular DNA. In the past, the small cells were large and empty, and the small cells were induced to rise and fall. Research collaborator: AOKI Kenhiro (Student, Graduate School of Life Sciences, Postdoctoral Program, Tokyo University of Science and Technology)