核膜形成と分解の分子機構

核膜形成和分解的分子机制

基本信息

批准号：
10159214
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10159214/
关键词：
核有糸分裂膜融合 NSF VCP

项目摘要

核膜とゴルジ体は有糸分裂時に分解・小胞化し、分裂終期に小胞が融合して再形成される。ゴルジ体の形成にはVCP/p97とNSFという2つのATPascが関与していることが示されているが、核膜の形成機構はまだよくわかっていない。VCP/p97の酵母のホモログはCDC48pであり、このタンパク質はカリオガミー(核膜融合)に関与する。我々はNSFがゴルジ体以外に核膜にも存在していることを見い出した。本研究の目的はVCP/p97とNSFが核膜融合に関与しているかどうかを調べることであり、本年度は以下の研究成果を得た。1) NSFは膜表在性のSNAPおよび膜内在性のSNARE(syntaxinやSNAP-25などのサブユニットから構成される)と複合体を形成して膜融合反応に関与する。抗SNAP抗体および抗SNAP-25抗体を作成し、それらの抗体がアフリカツメガエルの卵母細胞抽出液を用いたin vitroの核膜融合反応を阻害することを示した。抗体で認識されるアフリカツメガエルのタンパク質は既知のSNAP-25より約7kDa大きく、新規な分子種の可能性が考えられたので、現在このタンパク質のクローニングを進めている。2) NSFに対するモノクローン抗体2E5はHeLa細胞の核膜およびゴルジ膜のNSFを認識したが、モノクローン抗体2C8は核膜のNSFを認識しなかった。このことは核膜とゴルジ膜のNSFが異なる分子種である可能性を示唆している。3) VCP/p97は膜表在性のp47を介して膜内在性サブユニットのsyntaxin5に結合する。一方、CDC48pの膜内在性サブユニットはUfelp(このタンパク質もsyntaxinの一種)である。酵母のtwo-hybrid systemを用いてヒトのUfelpを同定した。現在、ヒトUfelpがVCPと結合するかどうかを調べている。

核膜和高尔基体在有丝分裂期间降解并囊泡，并在有丝分裂结束时进行改革。两种ATPASC，VCP/P97和NSF已显示与高尔基体的形成有关，但核膜形成的机理仍然未知。 VCP/p97的酵母同源物是cdc48p，涉及核膜（核膜融合）。我们发现，除了高尔基体外，NSF都存在于核膜中。这项研究的目的是研究VCP/P97和NSF是否参与核膜融合，今年我们获得了以下研究结果。 1）NSF与膜 - 超支快照和膜 - 超支幼虫（由诸如Syntaxin和Snap-25等亚基组成）形成复合物，以参与膜融合反应。制备了抗SNAP和抗SNAP-25抗体，并表明这些抗体使用爪蟾卵母细胞提取物抑制了体外核膜融合反应。抗体识别的爪蟾蛋白比已知的SNAP-25大约7 kDa，并且认为它是一种新颖的分子物种，因此目前正在执行该蛋白质的克隆。 2）对NSF的单克隆抗体2E5识别HeLa细胞的核膜和高尔基膜的NSF，而单克隆抗体2C8却不识别核膜的NSF。这表明核和高尔基膜的NSF可能是不同的分子物种。 3）VCP/p97通过浅表膜P47与子宫内膜亚基的Syntaxin5结合。另一方面，cdc48p的内质亚基是ufelp（也是一种语法素）。使用酵母双杂交系统鉴定出人UFELP。目前，我们正在研究人类UFELP是否与VCP结合。