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核膜形成と分解の分子機構

核膜形成和分解的分子机制

基本信息

批准号：
10159214
负责人：
多賀谷光男
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10159214/
关键词：
核有糸分裂膜融合 NSF VCP

项目摘要

核膜とゴルジ体は有糸分裂時に分解・小胞化し、分裂終期に小胞が融合して再形成される。ゴルジ体の形成にはVCP/p97とNSFという2つのATPascが関与していることが示されているが、核膜の形成機構はまだよくわかっていない。VCP/p97の酵母のホモログはCDC48pであり、このタンパク質はカリオガミー(核膜融合)に関与する。我々はNSFがゴルジ体以外に核膜にも存在していることを見い出した。本研究の目的はVCP/p97とNSFが核膜融合に関与しているかどうかを調べることであり、本年度は以下の研究成果を得た。1) NSFは膜表在性のSNAPおよび膜内在性のSNARE(syntaxinやSNAP-25などのサブユニットから構成される)と複合体を形成して膜融合反応に関与する。抗SNAP抗体および抗SNAP-25抗体を作成し、それらの抗体がアフリカツメガエルの卵母細胞抽出液を用いたin vitroの核膜融合反応を阻害することを示した。抗体で認識されるアフリカツメガエルのタンパク質は既知のSNAP-25より約7kDa大きく、新規な分子種の可能性が考えられたので、現在このタンパク質のクローニングを進めている。2) NSFに対するモノクローン抗体2E5はHeLa細胞の核膜およびゴルジ膜のNSFを認識したが、モノクローン抗体2C8は核膜のNSFを認識しなかった。このことは核膜とゴルジ膜のNSFが異なる分子種である可能性を示唆している。3) VCP/p97は膜表在性のp47を介して膜内在性サブユニットのsyntaxin5に結合する。一方、CDC48pの膜内在性サブユニットはUfelp(このタンパク質もsyntaxinの一種)である。酵母のtwo-hybrid systemを用いてヒトのUfelpを同定した。現在、ヒトUfelpがVCPと結合するかどうかを調べている。

The nuclear membrane decomposes and microcells re-form at the end of division. VCP/p97 and NSF are involved in the formation of nuclear membrane. VCP/p97 yeast fusion is related to CDC48p fusion, nuclear membrane fusion, etc. NSF is a nuclear weapon. The purpose of this study is to obtain the following results from the nuclear membrane fusion of VCP/p97 1)NSF membrane surface SNAP and membrane intrinsic SNARE(syntaxin and SNAP-25) complexes are formed and membrane fusion reactions are related. Anti-SNAP antibodies and anti-SNAP-25 antibodies were prepared and used in vitro to inhibit nuclear membrane fusion. Antibody recognition: SNAP-25 ~ 7kDa; new molecular species: SNAP-25 ~ 7kDa; new molecular species: 2)NSF antibody 2E5 recognizes the nuclear membrane of HeLa cells. NSF antibody 2C8 recognizes the nuclear membrane of HeLa cells. The possibility of nuclear membrane and NSF molecular species is discussed. 3)VCP/p97 combines with p47 in membrane surface properties and syntaxin5 in membrane intrinsic properties. One side, CDC 48p membrane intrinsic Yeast two-hybrid system uses the same method as Ufelp. Now, Ufelp and VCP are combined.