核膜形成と分解の分子機構

核膜形成和分解的分子机制

• 批准号: 10159214
• 负责人: 多賀谷 光男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10159214/
• 关键词: 核; 有糸分裂; 膜融合; NSF; VCP

核膜とゴルジ体は有糸分裂時に分解・小胞化し、分裂終期に小胞が融合して再形成される。ゴルジ体の形成にはVCP/p97とNSFという2つのATPascが関与していることが示されているが、核膜の形成機構はまだよくわかっていない。VCP/p97の酵母のホモログはCDC48pであり、このタンパク質はカリオガミー(核膜融合)に関与する。我々はNSFがゴルジ体以外に核膜にも存在していることを見い出した。本研究の目的はVCP/p97とNSFが核膜融合に関与しているかどうかを調べることであり、本年度は以下の研究成果を得た。1) NSFは膜表在性のSNAPおよび膜内在性のSNARE(syntaxinやSNAP-25などのサブユニットから構成される)と複合体を形成して膜融合反応に関与する。抗SNAP抗体および抗SNAP-25抗体を作成し、それらの抗体がアフリカツメガエルの卵母細胞抽出液を用いたin vitroの核膜融合反応を阻害することを示した。抗体で認識されるアフリカツメガエルのタンパク質は既知のSNAP-25より約7kDa大きく、新規な分子種の可能性が考えられたので、現在このタンパク質のクローニングを進めている。2) NSFに対するモノクローン抗体2E5はHeLa細胞の核膜およびゴルジ膜のNSFを認識したが、モノクローン抗体2C8は核膜のNSFを認識しなかった。このことは核膜とゴルジ膜のNSFが異なる分子種である可能性を示唆している。3) VCP/p97は膜表在性のp47を介して膜内在性サブユニットのsyntaxin5に結合する。一方、CDC48pの膜内在性サブユニットはUfelp(このタンパク質もsyntaxinの一種)である。酵母のtwo-hybrid systemを用いてヒトのUfelpを同定した。現在、ヒトUfelpがVCPと結合するかどうかを調べている。

During the fission of the nuclear membrane, に decomposes and shrinks into small cells, and at the end of the fission, the に small cells が fuse and て re-form される. の ゴ ル ジ body formation に は VCP/'re と NSF と い う 2 つ の ATPasc が masato and し て い る こ と が shown さ れ て い る が, nuclear membrane の form institutions は ま だ よ く わ か っ て い な い. VCP/'re の yeast の ホ モ ロ グ は CDC48p で あ り, こ の タ ン パ ク qualitative は カ リ オ ガ ミ ー (nuclear membrane fusion) に masato and す る. I 々 は NSF が ゴ ル ジ body outside に nuclear membrane に も exist し て い る こ と を see い out し た. Purpose this study の は VCP/'re と NSF が nuclear membrane fusion に masato and し て い る か ど う か を adjustable べ る こ と で あ り, below this year's は の research を た. Table 1) NSF は membrane in sexual の SNAP お よ び membrane internality の c2-style (syntaxin や SNAP - 25 な ど の サ ブ ユ ニ ッ ト か ら constitute さ れ る) と complex を form し て membrane fusion against 応 に masato and す る. Antibodies against the SNAP お よ び anti SNAP - 25 antibody を し, consummate そ れ ら の antibody が ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の oocytes extract を with い た in vitro の against nuclear membrane fusion 応 を resistance against す る こ と を shown し た. Antibody で know さ れ る ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の タ ン パ ク qualitative は already know の SNAP - 25 よ り about 7 kda big き く, new rules な molecular possibility of の が exam え ら れ た の で, now こ の タ ン パ ク qualitative の ク ロ ー ニ ン グ を into め て い る. 2) the NSF に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ン antibody 2 e5 は HeLa の nuclear membrane お よ び ゴ ル ジ membrane の NSF を know し た が, モ ノ ク ロ ー ン antibody 2 c8 は nuclear membrane の NSF を know し な か っ た. こ の こ と は nuclear membrane と ゴ ル ジ membrane の NSF が different な る molecules of で あ を る possibility in stopping し て い る. 3) VCP/p97 <s:1> membrane surface in situ <s:1> p47を interface て membrane in situ サブユニット <s:1> syntaxin5に binding する. One party, CDC48p の membrane internality サ ブ ユ ニ ッ ト は Ufelp (こ の タ ン パ ク qualitative も syntaxin の) で あ る. The yeast <s:1> two-hybrid systemを is used to determine <s:1> た with を てヒト <s:1> Ufelpを. Now, ヒトUfelpがVCPと in combination with する する <s:1> う う を を を.

项目成果

Mori et al.: "Amino-terminal region of SecA is involved in the function of SecG for protein translocation into Escherichia coli membrane vesicles." J.Biochem.124. 122-129 (1998)

Mori 等人：“SecA 的氨基末端区域参与 SecG 将蛋白质易位到大肠杆菌膜囊泡中的功能。”

Fukunaga et al.: "NSF is required for the brefeldin A-promoted disassembly of the Golgi apparatus." FEBS Letters. 435. 237-240 (1998)

Fukunaga 等人：“布雷菲德菌素 A 促进高尔基体解体需要 NSF。”

Tani et al.: "Hypothetical protein KIAA0079 is a mammalian homologue of yeast Sec24p." FEBS Letters. (in press).

Tani 等人：“假设蛋白 KIAA0079 是酵母 Sec24p 的哺乳动物同源物。”

Nishimune et al.: "NSF binding to GluR2 regulates synaptic transmission" Neuron. 21. 87-97 (1998)

Nishimune 等人：“NSF 与 GluR2 结合调节突触传递”神经元。

Yamaguchi et al.: "ADP-ribosylation factor-1 is sensitive to N-ethylmaleimide." J.Biochem.124. 1229-1236 (1998)

Yamaguchi 等人：“ADP-核糖基化因子-1 对 N-乙基马来酰亚胺敏感。”