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塩基ミスマッチ依存的DNA転移反応機構の解析

碱基错配依赖性DNA转移反应机制分析

基本信息

批准号：
18058009
负责人：
柳原克彦
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Transdisciplinary Research Integration Center (2007)Kyoto University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18058009/
关键词：
トランスポゾン DNA組換えファージ複合体形成転移ミスマッチ FRET

项目摘要

Muは,DNA複製を伴う転移を繰り返すことでコピー数を増やすファージで,転移反応を触媒するMuトランスポゼースとMu配列の右端50bpと数bpのフランキング配列のみで転移反応を再構成することができる。Mu配列の右端50bpは,その末端塩基が転移反応の際に切断され,さらに転移先につなぎかえられる。Muトランスポゼースは,末端5bpから50bpの間の二つの順向き繰り返し配列に結合することが報告されている。これまで,Mu配列の末端塩基を置換すると転移が起きないばかりか,トランスポゼースの四量体とMu DNAからなる高次複合体も形成できないことが知られていた。これに対し我々は,末端塩基が置換されていてもフランキングDNAが対合していなければ高次複合体が形成されることを見出した。この複合体は切断活性は無いが,つなぎかえの活性はあるものであった。さらに,Mu配列の末端を含む5bpを欠失したDNAでも転移活性のある高次複合体と同様の複合体が生じることを見出した。さらに,Mu配列の右端50bpにある二つのMuトランスポゼース結合部位の問に5bpを挿入すると複合体が形成されなくなるが,11bpを挿入すると効率よく複合体が形成されることを発見した。挿入配列が長くなるにつれ複合体はほとんど形成されなくなるが,挿入配列にニックを導入し大腸菌のHUタンパク質を加えることで活性のある高次複合体が再び形成されるようになった。以上の知見は,酵素の結合部位と作用部位が相互作用しながら酵素活性の発現につながる複合体形成を制御していることを示すものである。また,Muのミスマッチ特異的転移反応を応用し,特定の遺伝子に変異を持つラット個体をライブラリーから特定する方法を開発した。

Mu,DNA replication, migration, reverse transcription, reverse transcription. Mu alignment of the right end of the 50bp, the end of the base shift reverse cut off, this shift first cut off Mutual-base pairs are aligned in the forward direction between the terminal 5bp and 50bp. The terminal group of Mu ligand is replaced by the terminal group of Mu ligand, and the higher-order complex of Mu DNA is formed. In this case, the terminal group is replaced by the terminal group, and the DNA is combined to form a higher order complex.この复合体は切断活性は无いが,つなぎかえの活性はあるものであった。In addition, the terminal of Mu sequence contains 5bp missing DNA, and the higher-order complex is generated. In addition, the 50bp at the right end of the Mu sequence was inserted into the 5bp complex, and the 11 bp complex was inserted into the 5 bp complex. In addition, the high order complex was formed again. The above findings indicate that the binding site and the active site of the enzyme interact to control the formation of the complex. In this paper, the author introduces a new method for the research of the special shift reaction, which is based on the specific gene.