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複製チェックポイントによる複製フォーク安定化維持機構の解明

阐明复制检查点稳定和复制叉维持的机制

基本信息

批准号：
18058015
负责人：
田中克典
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kwansei Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18058015/
关键词：
複製チェックポイント分裂酵母 ChIP法 Mrcl 細胞周期染色体 Mrc1

项目摘要

ゲノムDNAの複製を完了させるためには、DNA複製フォークが安定に維持され、種々の障害を乗り越える必要がある。複製フォークにはその進行をモニターし、緊急時に複製フォークを保護する因子が付随していることが最近明らかとなってきた。それらは、Tof1/Swi1/Timeless-Csm3/Swi3/Tipin複合体(複製フォーク保護複合体)、およびMrc1/Claspinである。それらは、複製開始時に複製フォークにローディングされ、MCMやCdc45と相互作用しつつ、複製の進行をモニタリングし、複製フォーク複合体の活性や集合状態を細胞周期やチェックポイント応答と連動させる機能制御の役割をもつと考えられる。我々は、分裂酵母の系を用いて複製チェックポイントメディエーター分子Mrc1を中心に、複製フォークの保護とチェックポイント応答の連動について解析を行っている。クロマチン免疫沈降(ChIP)法により、Swi1-Swi3複製フォーク保護複合体依存的・複製チェックポイント非依存的に、複製の進行に伴いMrc1が複製フォークの上を移動しているという明確な結果を得た。さらに、Mrc1のDNA結合ドメインとして報告されている領域は、Mrc1の複製フォークへの結合に必要でないことがわかった。しかし、DNA結合ドメインの変異体はCPTに感受性を示し、Rad22-YFPを用いた観察により複製フォークの不安定化が生じていることもわかった。これらの結果より、Mrc1のDNA結合活性は、複製フォークへの結合以降の段階で、複製フォークの安定化に機能している事が示唆された。

DNA replication is complete, DNA replication is stable, and seed damage is necessary. Copy the code and copy the code in an emergency.それらは、Tof1/Swi1/Timeless-Csm3/Swi3/Tipin复合体(复制フォーク保护复合体)、およびMrc1/Claspinである。For example, when replication starts, replication starts, MCM Cdc45 interacts, replication progresses, replication complex activity, aggregation state, cell cycle, interaction, functional control, etc. We have a system of split yeasts that we use to replicate, protect, and analyze. ChIP method: Swi1-Swi3 replication protection complex dependent, replication independent, replication progress associated with Mrc1 replication protection complex upper, replication clear results obtained. Mrc1 DNA binding is reported to be necessary for replication of Mrc1. The DNA binding sites of different species are sensitive to CPT, and Rad22-YFP is used to detect replication and instability. As a result, the DNA binding activity of Mrc1 was demonstrated by the downgrading of replication and the stabilization of replication.