权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

超高速電子環状反応を基盤とするクリック生体高分子標識化法の開発とその展開

基于超快电循环反应的点击生物聚合物标记方法的研制与发展

基本信息

批准号：
18850014
负责人：
田中克典
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18850014/
关键词：
アザ電子環状反応標識化蛍光 PET イメージング

项目摘要

本研究は、申請者らが独自に開発した"高速アザ電子環状反応"による修飾法を用い、生体分子アミノ基選択的な標識化法を新たに開発する。次いでこれを用いて蛍光および放射線標識による生体内イメージングを実施し、新たな生体内現象を明らかにすることを目的としている。これまでに放射性金属配位子DOTA(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)を持つ共役エステルアルデヒドプローブを新たにデザインし、リジン残基との超高速電子環状反応に基づいて、微量生体高分子の放射線標識化の開発とPETイメージングへの応用を行った。Stilleカップリングにより効率的に合成したプローブを用いて、1)ペプチドとしてソマトスタチンを、2)タンパク質として、ヒト血清アルブミン(HSA)や糖タンパク質であるオロソムコイドを、さらには3)抗体としてanti-GFP抗体の標識化を行った結果、いずれの場合においても室温・低濃度(10-6M)の条件下、10分以内での標識化に成功した。さらに得られたソマトスタチン標識体に対して放射性金属である68Gaを導入し、ラットやラビットにおけるPETイメージングを達成した。一方、本プローブに対してさらに標的生体分子と相互作用する低分子リガンドをコンジュゲートさせ、標的分子の特定のリジン残基のみの蛍光修飾に成功した。すなわち、HSAとこれと相互作用するリガンドとしてクマリン誘導体を用いて検討したところ、HASに存在する59個のリジン残基のうち、リガンド認識部近傍に存在する1つのリジン残基のみを選択的に蛍光標識化することに成功した。さらに相互作用に用いたクマリン低分子リガンドは、リジン残基修飾の後、環化生成物のピリジニウムイオンへの自然酸化に伴って、中性条件下のもと自動的に修飾分子から加水分解されることを見出した。以上の結果は、生理的条件下のもと蛍光部位のみの標識化が迅速かつ簡便に実現できることを示しており、今後はこれらの結果を基に糖鎖のPETおよび蛍光イメージングを中心に検討する予定である。

In this research, the applicant has independently developed a "high-speed atom electron cyclic reaction" modification method and a new labeling method for biomolecule atom base selection. The radioactive ray mark of the time is the いて荍光およびによる生内イメージングを実士し、新たな生内phenomenon を明らかにすることをpurpose としている.これまでにRadioactive metal ligand DOTA(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid) をachita co-service エステルアルデヒドプローブを新たにデザインし, リジン簪とのSuper-fast electron Cyclic reactive polyethylene glycol, radioactive labeling of trace amounts of biopolymers, PET polyethylene terephthalate. Stille カップリングによりefficient synthesis したプローブを use いて、1) ペプチドとしてソマトスタチンを, 2)タンパク性として, ヒトSerum アルブミン(HSA) やsugar タンパク性であるオロソムコイドを、さらには3) Antibody としてAnti-GFP antibody labeling を行った results、いずIn this case, under the conditions of room temperature and low concentration (10-6M), the labeling can be successfully completed within 10 minutes.さらに得られたソマトスタチンmarking body に対してradioactive metal である68G aを Importし、ラットやラビットにおけるPETイメージングをachievedした. On the one hand, the biomolecules and interactions of this biomolecule target are low molecular weight molecules.コンジュゲートさせ、The specific のリジン residue of the target molecule was successfully modified by light.すなわち, HSA とこれとinteraction するリガンドとしてクマリンinducing body を用いて検したところ, HAS にexistent する59のリジンジンのうち, リガンドKnowing department near the presence of する1 つのリジンジンのみを选択's に荍photomarking することにsuccessful. The さらに interaction is modified with いたクマリン low molecular weight リガンドは and リジン residues, and the cyclization product is のピリジニウムThe natural acidification of イオンへに本って, and the のもと automatic に-modified molecule under neutral conditions, the されることを见出した. The above results show that under physiological conditions, the light parts can be identified quickly and easily.おり、From now on はこれらのRESULTSをbasedにsugarlockのPETおよび蛍光イメージングをcenter に検 Discussion する Predetermined である.