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大脳基底核におけるCa^<2+>の役割に関する基礎的研究

Ca^<2+>在基底节中作用的基础研究

基本信息

批准号：
60217011
负责人：
宮本英七
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大脳基底核疾患の病因、病態についてはまだ不明の点が多い。この部位に存在するドーパミンの生合成はカテコールアミンの律速段階酵素であるチロシン水酸化酵素によって調節されている。チロシン水酸化酵素の活性調節には、從来から、cAMP依存性プロテインキナーゼによる反応が知られている。最近、脳内に新しい【Ca^(2+)】、カルモデユリン依存性プロテインキナーゼの存在することを見出し、均質な状態にまで精製した。本酵素はチロシン水酸化酵素の活性化にも関与することが明らかにされた。本研究では、脳【Ca^(2+)】、カルモデユリン依存性プロテインキナーゼのモノクローン抗体を作製し、その性質について検討した。さらに、酵素の脳内分布を検索した。1)BALB/Cマウスの腹腔内に、精製酵素と百日咳死菌体の混合溶液を2週間毎に1回、3ヶ月間注射した。血清中の抗体価を確認後、常法に從い、細胞融合、クローニングして抗体を得た。得られた抗体は抗Ig【G_1】,Ig【G_2】a,Ig【G_2】bとは反応せず、抗IgMと反応した。從って、作製したモノクローン抗体はIgGではなくIgMと結論された。2)作製したモノクローン抗体は脳【Ca^(2+)】,カルモデユリン依存性プロテインキナーゼの49Kサブユニットとのみ反応し、60Kサブユニットとは反応しなかった。3)精製酵素をあらかじめ自動リン酸化した後、酵素の免疫沈殿反応を行なった。49K蛋白質のほかに、60K蛋白質が沈殿した。作製したモノクローン抗体は49K蛋白質とのみ交又反応したが、60K蛋白質も酵素のサブユニットと考えられた。4)ラット脳を6個所の部位に分け、ホモジェネイトの上清分画をDEAE-セルロース,カルモデュリン親和性力ラムを用いて調製し、イムノブロッティング法を用いて検索した。調べたいずれの部位においても、49K蛋白質は主たる蛋白質バンドの1つとして存在した。海馬、線条体に高く、ついで、大脳,小脳,視床下部,中脳十延髄の順であった。

The cause and pathogenesis of basal ganglia disease are many and unknown.この parts に existence するドーパミンの生综合はカテコールアミンのlaw Speed step enzyme であるチロシン water acidifying enzyme によって regulation されている. The activity of チロシン water acidifying enzyme regulates には, the original から, and the cAMP-dependent プロテインキナーゼによる濜が知られている. Recently, 脳内に新しい【Ca^(2+)】, カルモデユリンdependencyプロThe existence of the テインキナーゼのすることを见出し, the homogeneous state and the refinement are the same. This enzyme is related to the activation of the water acidifying enzyme and the activation of the enzyme. This study focuses on the dependence of では, 脳【Ca^(2+)】, and カルモデユリンンキナーゼのモノクローンAntibodiesをManufacturingし、その性について検した.さらに、Enzymes are distributed in the の脳を検SOした. 1) Intraperitoneal injection of BALB/C マウスの mixed solution of purified enzyme and killed pertussis bacteria once every 2 weeks and injection every 3 months. After confirming the presence of antibodies in the serum, the usual method is to obtain the antibodies by cell fusion and クローニングして antibodies. Obtained antibodies are anti-Ig【G_1】, Ig【G_2】a, Ig【G_2】b, anti-antibodies, anti-IgM and anti-antibodies. From って, したモノクローン antibody はIgG ではなくIgM と conclusion された. 2) Production of したモノクローン antibody は脳【Ca^(2+)】, カルモデユリン-dependent プロテインキナーゼの49K サブユニットとのみanti-応し, 60K サブユニットとは anti-応しなかった. 3) After the purified enzyme is automatically acidified, the enzyme is immune and reacts with the enzyme. 49K protein and 60K protein. We produce 49K protein antibody, 49K protein enzyme, and 60K protein enzyme. 4) ラット脳を6 partsに分け、ホモジェネイトの上清画をDEAE-セルロース, The カルモデュリンaffinity ラムを is modulated with いて, and the イムノブロッティング法を is made with いて検SO is した. Adjust the parts of the body and the 49K protein, the main body of the protein. The hippocampus, line body, に高く, ついで, 大脳, 小脳, the lower part of the optic bed, middle 脳十 Yan髄の顺であった.