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脳海馬シナプス伝達長期増強に関する分子生物学的研究

大脑海马突触传递长期增强的分子生物学研究

基本信息

批准号：
05267238
负责人：
宮本英七
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では海馬CA1領域におけるLTP誘導とCaMキナーゼII活性化反応を調べた。海馬放線状層(stratum radiatum)のCA1領域入力線維2ケ所に刺激電極をおき,100Hz,4パルスを5Hz間隔で10回電気刺激した。この刺激で,LTPが誘導された。対照は,10Hz,100パルスを同じ部位に刺激した(低頻度刺激)。LTP誘導後,CA1錐体細胞部分をパンチアウト(約0.5mg組織量)し,トリトンX-100を含む緩衝衡液でホモジェナイズし、遠心沈殿後、上清分画についてCaMキナーゼII酵素活性を測定した。1)LTP誘導後、時間的経過で、CaMキナーゼIICa^<2+>非依存性活性を測定すると,0時間,対照に比較して有意に上昇していた。興味深いことには,Ca^<2+>/CaM依存性活性も,LTP誘導の早い時間的経過の中で,増加していたことである。2)あらかじめ,NMDA受容体拮抗薬であるAP5とインキュベイトした海馬切片を用いると,LTP誘導およびCaMキナーゼII活性化反応が阻害された。また,蛋白質基質であるシナプシンIを用いても同様の結果が得られた。3)プロテインホスファターゼ阻害剤であるカリキュリンAをあらかじめ投与すると,CaMキナーゼII活性化反応のより大きな増加が認められ、LTP誘導が観察された。4)生後4日目ラット海馬切片を分離し、切片そのものを培養して、約10日後実験に使用した。このような培養切片においても同様の結果を示した。以上の結果は,LTP誘導がNMDA受容体刺激によって惹起され、CaMキナーゼII活性化反応が関与している可能性を強く示唆しているものと結論される。今後、CaMキナーゼII活性化反応に続く基質の燐酸化反応とLTP維持反応との関係およびグルタミン酸受容体刺激,LTP誘導後に,CaMキナーゼIIの遺伝子発現刺激効果への関与について明らかにしていきたいと考えている。

In this study, the CA1 domain of the hippocampus was investigated for its LTP-induced activation and activation of CaM キナーゼII and its regulation. The CA1 field of the stratum radiatum of the hippocampus is stimulated by stimulating electrodes of dimension 2, 100Hz, 4Hz, 5Hz intervals, and 10-return stimulation.このstimulationで, LTPがinducingされた.対光は, 10Hz, 100パルスを same parts of the stimulation (low frequency stimulation). After LTP induction, the CA1 pyramidal cell part contains をパンチアウト (approximately 0.5mg tissue amount), トリトンX-100をThe buffer balance liquid was measured, and the enzyme activity of the supernatant and the supernatant was measured. 1) After LTP induction, the time-dependent activity of CaM キナーゼIICa^<2+> was measured and compared at 0 time, and the increase in the activity was measured. The interest is deep, the Ca^<2+>/CaM-dependent activity is active, and the time of LTP induction is early and in the middle. 2) NMDA receptor antagonist 薬であるAP5 とインキュベイトしたhippocampus The slices were made with いると, LTP-induced およびCaMキナーゼII activation and reaction blockage された.また, protein matrix であるシナプシンIを Use いても同様のRESULTS られた. 3) プロテインホスファターゼ hinder 剤であるカリキュリンAをあらかじめvote to すると, CaM キナーゼゼII activation reacts to the きなincrease and adds がcognition められ, LTP induces が観看された. 4) The hippocampus is sliced and separated on the 4th day after birth, and the slices are cultured and used after about 10 days.このような culture slices においても同様のRESULTS をshowした. The above results show that LTP induces NMDA receptor stimulation and induces CaM.ーゼII activation reaction is related to the probability of the reaction and the conclusion is strong. From now on, CaM キナーゼII activates the anti-reactive protein matrix and acidifies the anti-reactive protein and LTP maintains the anti-reactive protein relationship. After stimulation and LTP induction, the stimulating effect of CaM キナーゼゼの缝子発 showed the stimulating effect and the stimulating effect was the same as the stimulating effect.