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脳海馬シナプス伝達長期増強に関する分子生物学的研究

大脑海马突触传递长期增强的分子生物学研究

基本信息

批准号：
06260233
负责人：
宮本英七
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度に引き続き海馬CA1領域におけるLTP誘導とCaMキナーゼII活性化反応を調べた。海馬放線状層(stratum radiatum)のCA1領域入力線維2ヶ所に刺激電極をおき,テタヌス性電気刺激を与えた。この刺激で,LTPが誘導された。対照は,同じ部位を低頻度の同じ強さの電気刺激を与えた。LTP誘導後,CA1錐体細胞部分をパンチアウト(約0.5mg組織量)し,トリトンX-100を含む緩衝液でホモジェナイズし,遠心沈殿後,上清分画についてCaMキナーゼII酵素活性を測定した。1)LTP誘導後,時間的経過で,CaMキナーゼII Ca^<2+>非依存性活性を測定すると,0時間,対照に比較して有意に上昇していた。興味深いことには,Ca^<2+>/CaM依存性活性も,LTP誘導の早い時間的経過の中で,増加していたことである。2)あらかじめ,NMDA受容体拮抗薬であるAP5とインキュベイトした海馬切片を用いると,LTP誘導およびCaMキナーゼII活性化反応が阻害された。また,蛋白質基質であるシナプシンIを用いても同様の結果が得られた。3)生後4日目ラット海馬切片を分離し,切片そのものを培養して,約10日後実験に使用した。このような培養切片においても同様の結果を示した。4)海馬切片をあらかじめ^<32>P-燐酸でラベルしておき,LTPを誘導すると,CaMキナーゼII自己燐酸化反応が確認された。以上の結果は,LTP誘導がNMDA受容体刺激によって惹起され,CaMキナーゼII活性化反応が関与している可能性を強く示唆しているものと結論される。今後,CaMキナーゼII活性化反応に続く基質の燐酸化反応とLTP維持反応との関係およびグルタミン酸受容体刺激,LTP誘導後に,CaMキナーゼIIの遺伝子発現刺激効果への関与について明らかにしていきたいと考えている。

Last year, the hippocampus CA1 area was activated and the LTP induced and CaM activating reaction was adjusted. The CA1 area of the stratum radiatum of the hippocampus is connected to the input line dimension 2 and the stimulating electrodes are をおき, テタヌス性electric stimulation を and えた.このstimulationで, LTPがinducingされた.対光は, the same part is the same as the low-frequency and strong electric stimulation を and the えた. After LTP induction, the CA1 pyramidal cell part contains をパンチアウト (approximately 0.5mg tissue amount), トリトンX-100をThe buffer solution was used as a buffer, and the enzyme activity of the supernatant was measured using CaM's II enzyme activity. 1) After the induction of LTP, the time passed, the CaM キナーゼゼCa^<2+>-independent activity was measured and measured at 0 time, and the 0 time was compared and the increase was measured. The interest is deep, the Ca^<2+>/CaM-dependent activity is active, and the time of LTP induction is early and in the middle. 2) NMDA receptor antagonist 薬であるAP5 とインキュベイトしたhippocampus The slices were made with いると, LTP-induced およびCaMキナーゼII activation and reaction blockage された.また, protein matrix であるシナプシンIを Use いても同様のRESULTS られた. 3) On the 4th day after birth, the hippocampus is sliced and separated, and the slices are cultured and used after about 10 days.このような culture slices においても同様のRESULTS をshowした. 4) Hippocampal slice をあらかじめ^<32>P-Acid acid でラベルしておき, LTP を-induced すると, CaM キナーゼII self-acidification reaction がconfirmation された. The above results show that LTP induces NMDA receptor stimulation and causes CaM.ーゼII activation reaction is related to the probability of the reaction and the conclusion is strong. In the future, CaM キナーゼII activates the oxidation matrix and acidifies the ionization and LTP to maintain the ionization relationship and the acid receptor thorn After stimulation and LTP induction, the stimulating effect of CaM キナーゼゼの缝子発 showed the stimulating effect and the stimulating effect was the same as the stimulating effect.