Identifizierung und Charakterisierung der Arg-100-Transferrinrezeptor-Sheddingprotease

Arg-100 转铁蛋白受体脱落蛋白酶的鉴定和表征

• 批准号: 5220036
• 负责人: Professor Dr. Hendrik Fuchs
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Laboratoriumsmedizin, Klinische Chemie und Pathobiochemie (CVK)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1998-12-31 至 2002-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5220036?language=en
• 关键词: Identifizierung; und; Charakterisierung; der; Arg

Der Transferrinrezeptor (TfR) vermittelt über Bindung und Internalisierung des Eisentransportproteins Transferrin die Eisenaufnahme in die Zelle. Die extrazelluläre Domäne des humanen membranständigen TfR kann durch proteolytische Spaltung Cterminal von Arg-100 ins Serum freigesetzt werden, wo sie als 660 Aminosäuren großer Serum-TfR vorkommt. Es wird vermutet, daß der Sheddingprozeß eine wesentliche Rolle für die Regulation der Zahl der TfR-Moleküle an der Zelloberfläche spielt. Die das Shedding katalysierende Protease ist bisher jedoch nicht bekannt. Ziel ist es, die TfR-Shedding-Protease zu identifizieren, zu reinigen, zu klonieren und funktionell zu charakterisieren. Zunächst soll die Protease mit verschiedenen Methoden wie der Affinitätschromatographie über immobilisierte, reversibel bindende Inhibitoren gereinigt und N-terminal sequenziert werden. Durch die Immunisierung von Mäusen sollen monoklonale Antikörper gewonnen werden. Unter Verwendung degenerierter Primer soll die cDNA der Protease mittels RT-PCR, EST-Datenbankvergleich sowie 3'- und 5'-RACE identifiziert werden. Alternativ soll die cDNA durch DNA-Hybridisierung oder Expressionsklonierung aus cDNA-Banken isoliert werden. Die Funktionen der Protease, ihre Regulation und ihre Lokalisation sollen anschließend im Zellkulturmodell und an Gewebeschnitten umfassend analysiert werden.

转铁蛋白受体（TfR）是转铁蛋白在细胞内的结合和内化。人膜TfR的异常区可通过蛋白水解法从韦尔登中分离出Arg-100的C端，其中660个氨基酸可用于血清TfR。Es wird vermutet，dayders der Sheddingprozekeine wesentliche Rolle für die Regulation der Zahl der TfR-Moleküle an der Zelloberfläche spielt.蛋白酶的脱落是不可能的。TfR-脱落-蛋白酶是一种鉴定、再鉴定、克隆和功能鉴定的酶。用亲和层析法纯化蛋白酶，得到可逆结合抑制剂和韦尔登。Mäusen的进口商必须购买韦尔登。利用RT-PCR、EST数据库和3 '-RACE技术对蛋白酶cDNA进行检测。可选择通过DNA杂交或从cDNA文库中分离表达cDNA。蛋白酶的功能、调节和局部化在Zellkulturmodell和Gewebeschnitten umfasssiert韦尔登中解决。