家族正大腸腺腫症関連遺伝子の単離と解析

家族性腺瘤性息肉病阳性相关基因的分离与分析

基本信息

批准号：
62614503
负责人：
湯浅保仁
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62614503/
关键词：
家族性大腸腺腫症遺伝病ポリープ大腸癌癌遺伝子

项目摘要

家族性大腸腺腫症(FPC)におけるポリープ発生に関連した遺伝子を同定するため, ポリープと正常大腸粘膜において発現量に差のあるcDNA7ローンの単離を試みた. はじめに, 正常大腸粘膜及びFPC患者のポリープよりcDNAライブラリーを作製した. 正常及びポリープからのプローブを用い分別的ハイブリダイゼーション法により, ポリープまたは正常粘膜で発現の高いcDNAクローンを検索した. その結果, ポープの方で, より発現の高いcDNAクローンを2株得た. 正常細胞の方で, より発現の高いクローンはまだ得られていない.また, FPC発症よ関連した癌遺伝子を検出するため, DNAをNIH3T3細胞に導入したあとヌードマウスに移植して腫瘍を形成するか否かを検討した. FPC患者のポリープ6例, 大腸癌1例, 抹消血リンパ球2例について調べたところ, 全例でAlu配列陽性の腫瘍が形成された. この中で癌遺伝子の存在が確かな2例につき詳しく解析した. rasを含む10種類の癌遺伝子を各々プローブとしたハイブリダイゼーションにより, 1例のポリープ由来癌遺伝子はN-rasであることがわかった. もう1例は抹消血リンパ球由来で, 調べた癌遺伝子のどれとも反応せず, まだ調べていない既知の癌遺伝子か, 新しい遺伝子と考えられる. 現在, EMBL3ファージを用いてこの遺伝子のクローニングをおこなっている.最近, FPCの原因遺伝子が染色体の5番にあるらしいことが欧米で報告された. 日本人のFPCでも同じ部位に異常があるか否かを調べるため, 同じプローブを用いて検討した. 11家系54名について調べたが, ヘテロになったのは1家系3名のみで, 他はホモのため充分な解析ができなかった. 結論を出すには更に多くのプローブ及び家系を集めて検討する必要がある.

为了鉴定与家族性腺瘤病（FPC）中息肉发育相关的基因，我们试图分离息肉和正常结肠粘膜中具有不同表达水平的cDNA7贷款。首先，我们从正常结肠粘膜和FPC患者息肉的息肉中创建了cDNA文库。使用正常和息肉，使用来自正常和息肉的探针，通过差异杂交搜索cDNA克隆在息肉或正常粘膜上的高表达cDNA克隆。结果，我们在教皇中获得了两个高度表达的cDNA克隆。在正常细胞中尚未获得更高表达的克隆。此外，为了检测与FPC发育有关的癌基因，我们研究了是否将DNA引入NIH3T3细胞中，然后将其移植到裸鼠中以形成肿瘤。六例息肉病例，一个结肠癌和两个FPC患者的两个外周血淋巴细胞，两个外周血淋巴细胞构成ALU序列阳性的肿瘤。详细分析了两种发现具有固体存在的癌基因的病例。包括RAS在内的10种癌基因的杂交表明，一种息肉中的息肉源性癌基因是N-Ras。另一种病例来自外周血淋巴细胞，并且没有与所检查的任何癌基因反应，并且被认为是尚未研究的已知癌基因或新基因。当前，EMBL3噬菌体用于克隆该基因。最近，在西方据报道，FPC的病因基因在染色体上排名第五。为了确定日本FPC中是否存在异常，使用了相同的探针来研究同一部位是否有异常。我们调查了11个家庭中的54人。一个家庭中只有三个人变得异型，而另一些人则是同源的，并且不可能进行足够的分析。为了得出结论，有必要收集更多的探测和家庭并考虑它们。