ヒト唾液腺癌細胞における筋上皮或は腺房細胞に分化誘導する細胞性因子の産生と特性

人唾液腺癌细胞诱导分化为肌上皮细胞或腺泡细胞的细胞因子的产生和特征

• 批准号: 01015070
• 负责人: 佐藤 光信
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015070/
• 关键词: ヒト唾液腺癌細胞; 造腫瘍性ヒト唾液腺介在部導管上皮細胞; 唾液腺上皮細胞; 唾液腺腺房細胞; 分化因子; 分化誘導

1.ヒト唾液腺癌細胞(HSG)を5ーazacytidineで処理して、細胞DNAのhyponethylationを惹起することにより分化誘導された筋上皮細胞(HSGーAZA1)と腺房細胞(HSGーAZA3)を無血清培地で培養した上清から、分化因子(AZA1及びAZA3因子)を調製した。分化因子の活性は、in vitro及びヌードマウスで増殖しているHSG細胞の表現形質に及ぼす影響を解析することにより測定した。この場合、筋上皮細胞の表現形質としてはミオシン、ミオフィラメント、オキシトシンレセプター、Sー100タンパクのbeta鎖を、腺房細胞の表現形質としてはアミラーゼを指標として、酵素抗体法、immunoblotting、オートラジオグラフィー或いは免疫電顕法により解析した。また、細胞の超微構造について検索した。分化因子(AZA1及びAZA3因子)は無血清培養上清よりDEAEセルローズクロマトグラフィー及び高速液体クロマトグラフィー(TSKーGEL Gー3000SWカラム及びハイポアーRPー304 C_4逆相カラム)により精製した。このAZA1因子はHSG細胞を特異的に筋上皮細胞に、AZA3因子はHSG細胞を腺房細胞に分化誘導することが明らかになった。なお、AZA1因子は分子量20,000のAZA3因子は分子量30,000のポリペプチドである。更に、AZA1及びAZA3因子のポリペプチドの一次構造を解析し、また分化因子に対する単クローン抗体を調製し反応系の特性を検索した結果、AZA1及びAZA3因子はTGFーbeta、TNF、ILー6のような細胞分化に働くサイトカインと異なる従来報告されていない新しい分化因子であることを示唆する実験結果を得た。2.HSG細胞の分化・増殖機構について研究する過程で、HSG、HSGーAZA1及びHSGーAZA3細胞はニューロフィラメントを発現し、更にHSGーAZA1細胞はNGFと反応して神経突起様構造物を形成することより、HSG細胞は神経外胚葉起源であることが示唆された。加えて、HSGーAZA3細胞は1alpha、25ーdihydrovitaminD_3により軟骨細胞に分化誘導されることを明らかにしたので、併せて報告する。

1. Salivary gland carcinoma cells (HSG) were treated with 5-azacytidine, DNA hyponylation was induced, differentiation was induced, tendon epithelial cells (HSG AZA1) and glandular cells (HSG AZA3) were cultured in serum-free medium, supernatant was obtained, differentiation factors (AZA1 and AZA3 factors) were modulated. The activity of differentiation factors in vitro and in vitro was determined by analyzing the effects of differentiation factors on HSG cell morphology and proliferation. In this case, the expression quality of tendon epithelial cells is analyzed by enzyme antibody method, immunoblotting method, or immunoelectroanalysis method. The cell ultrastructure was examined. The differentiation factors (AZA1 and AZA3 factors) were purified from serum-free culture supernatant by DEAE and high speed liquid culture supernatant (TSK GEL G-3000SW and RP-304 C_4 reverse phase). Aza-1 factor is specific for HSG cells, and AZA-3 factor is specific for HSG cells. AZA1 factor has a molecular weight of 20,000 and AZA3 factor has a molecular weight of 30,000 In addition, the primary structure of AZA1 and AZA3 factors was analyzed, and the differentiation factors were analyzed to modulate the characteristics of anti-tumor cells. The results showed that AZA1 and AZA3 factors were different from beta, TNF and IL-6 in cell differentiation. 2. The development of differentiation and growth mechanisms in HSG cells, HSG cells and HSG cells, especially HSG cells and HSG cells, and the formation of neuroblast structures in HSG cells. In addition, HSG-AZA3 cells were induced to differentiate into 1alpha and 25-dihydrovitaminD_3 cells.

项目成果

Hiroki Iga: "Expression of neurofilaments in a neoplastic human salivary intercalated duct cell line or its derivatives and effect of nerve growth factor on the cellular proliferation and phenotype" Cancer Research. 49. 6708-6719 (1989)

Hiroki Iga：“神经丝在肿瘤性人唾液闰管细胞系或其衍生物中的表达以及神经生长因子对细胞增殖和表型的影响”癌症研究。

Mitsunobu Sato: "The cellular factors that induce specifically differentiation toward myoepithelial or acinar cells in a neoplastic human salivary intercalated duct cell line" Cancer Research.

Mitsunobu Sato：“在肿瘤性人类唾液闰管细胞系中诱导向肌上皮或腺泡细胞特异性分化的细胞因子”癌症研究。

Masayuki Azuma: "Induction of cells with a chondrocyteーlike phenotype by treatment with 1alpha,25ーdihydroxyvitamin D_3in a human salivary acinar cell line" Cancer Research. 49. 5435-5442 (1989)

Masayuki Azuma：“在人唾液腺泡细胞系中用 1α,25-二羟基维生素 D_3 诱导具有软骨细胞样表型的细胞”癌症研究 49. 5435-5442 (1989)。