血小板中の新しい細胞増殖抑制因子とその調節タンパク質の遺伝子クロ-ニング

血小板中新型细胞生长抑制因子及其调节蛋白的基因克隆

• 批准号: 01614528
• 负责人: 中村 敏一
• 金额: $ 7.04万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01614528/
• 关键词: 血小板; 細胞増殖抑制因子; cDNAクロ-ニング; EGF-like domain; short consensus repeat; TGF-β masking protein 110 kD subunit

ラット血小板から純化したmasking proteinを用い、110kDサブユニットの部分アミノ酸配列を決定した。4ヶ所のペプチドフラグメントのアミノ酸配列を基にして合成したオリゴヌクレオチドをプロ-ブとしてラット巨核球のcDNAライブラリ-をスクリ-ニングした。その結果、5個のcDNAクロ-ンが得られ、そのうち最長の5kbのクロ-ンを用い、Northern blot analysisを行ったところ110kDサブユニットのmRNAのサイズは6kbであることが明かとなった。5kbのcDNAの塩基配列を決定したところ、4.2kbのopen reading frameを含み、この中には上記4種類のペプチドフラグメントのアミノ酸配列全てを含んでいた。mRNAのサイズからこのクロ-ンの上流には約1kbほどの配列が欠けていると考えられるので、5'ー上流1kbをカバ-するcDNAを得るためprimer extended cDNA libraryをスクリ-ニングした。結果として110kDサブユニットのmRNA 6kbに対応する全てのcDNAクロ-ンを単離した。110kDサブユニットのmRNAは約5kbの長いopen reading frameを持ち、アミノ酸数にして約1700残基の大きな前駆タンパク質をコ-ドしている。成熟型の110kDサブユニットは前駆タンパク質の約600残基目からC末端側に位置し、841残基のアミノ酸からなる。N末端側にはHisーArgーArgーArg、C末端側にはGlyーArgーArgーArgの配列からなるプロセッシングサイトがあり、ある種のセリンプロテア-ゼで切断され、成熟110kDサブユニット分子中にはEGF like domainが13個繰り返して並んでおり、またshort consensus repeatと類似した新しいinternal repeatを2個含んでいるなど実にユニ-クな構造であることが明らかとなった。

ラ ッ ト platelet か ら purification し た masking protein を い, 110 kd サ ブ ユ ニ ッ ト の part ア ミ ノ acid with column を decided し た. 4 what ヶ の ペ プ チ ド フ ラ グ メ ン ト の ア ミ ノ acid with column を base に し て synthetic し た オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を プ ロ - ブ と し て ラ ッ ト giant nuclear ball の cDNA ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ - ニ ン グ し た. そ の results, five の cDNA ク ロ - ン が have ら れ, そ の う ち の longest 5 KB の ク ロ - ン を い, Northern blot analysis line を っ た と こ ろ 110 kd サ ブ ユ ニ ッ ト の mRNA の サ イ ズ は 6 KB で あ る こ と が Ming か と な っ た. 5 KB の cDNA の salt base with column を decided し た と こ ろ, 4.2 KB の open reading frame を み, こ の in に は written four kinds の ペ プ チ ド フ ラ グ メ ン ト の ア ミ ノ acid with column full て を containing ん で い た. MRNA の サ イ ズ か ら こ の ク ロ - ン の upper に は about 1 KB ほ ど の match column が owe け て い る と exam え ら れ る の で, 5 'ー upper 1 KB を カ バ - す る cDNA を have る た め primer extended cDNA library を ス ク リ - ニ ン グ し た. Results と し て 110 kd サ ブ ユ ニ ッ ト の mRNA 6 KB に 応 seaborne す る full て の cDNA ク ロ - ン を 単 from し た. 110 kd サ ブ ユ ニ ッ ト の mRNA は about 5 KB の い long open reading frame を hold ち, ア ミ ノ acid number に し て about 1700 residues の big き な before 駆 タ ン パ ク qualitative を コ - ド し て い る. Mature の 110 kd サ ブ ユ ニ ッ ト は before 駆 タ ン パ ク qualitative の about 600 residues mesh か ら C terminal side し に position, 841 residues の ア ミ ノ acid か ら な る. N terminal side に は ihs ー Arg ー Arg ー Arg, C terminal side に は Gly ー Arg ー Arg ー Arg の match column か ら な る プ ロ セ ッ シ ン グ サ イ ト が あ り, あ る kind の セ リ ン プ ロ テ ア - ゼ で cut さ れ, mature 110 kd サ ブ ユ ニ ッ ト molecule に は EGF like Domain が 13 Qiao り return し て and ん で お り, ま た short consensus repeat と similar し た new し い internal repeat を contains two ん で い る な ど be に ユ ニ - ク な tectonic で あ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

中村敏一: "癌と腫瘍増殖因子(TGF)" 臨床病理. 82. 8-16 (1989)

Toshikazu Nakamura：“癌症和肿瘤生长因子 (TGF)”《临床病理学》82. 8-16 (1989)。

Ichihara,A.: "Normal and Neoplastic Growth in Hepatology:Mechanisms controlling growth of hepatocytes in primary" Plenum Press, 1990

Ichihara,A.：“肝病学中的正常和肿瘤生长：原代肝细胞生长的控制机制”Plenum Press，1990

Okada,F.: "Purification and structural analysis of a latent form of transforming growth factor-β rat platelets" J.Biochem.106. 304-310 (1989)

Okada, F.：“转化生长因子-β 大鼠血小板的潜在形式的纯化和结构分析”J.Biochem.106（1989）。

Kinoshita,T.: "Dramatic increase in HGFmRNA in livers of rats treated with CCl_4 and patients with hepatitis." Biochem.Biophys.Res.Commun.165. 1229-1234 (1989)

Kinoshita,T.：“用 CCl_4 治疗的大鼠和肝炎患者的肝脏中 HGFmRNA 显着增加。”

橋村悦朗: "初代培養肝細胞を用いた人工肝臓作成法" 組織培養. 15. 25-29 (1989)

Etsuro Hashimura：“使用原代培养肝细胞创建人工肝脏的方法”《组织培养》15. 25-29 (1989)。