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lpr遺伝子導入リウマチ因子産生惹起各種マウスにおけるIgG糖鎖構造異常の解析

导入lpr基因诱导产生类风湿因子的各类小鼠IgG糖链结构异常分析

基本信息

批准号：
03680155
负责人：
水落次男
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リウマチ因子を産生しリウマチ様関節炎を発症する自己免疫疾患マウスMRL/lprの血清中IgGの糖鎖が慢性関節リウマチ患者の血清IgGの糖鎖と同様にガラクト-スを欠くという構造異常を起こしていることを、IgGの詳細な糖鎖構造解析によって我々はすでに明らかにしている。本研究では、詳細な糖鎖構造解析をせずに血清中のIgGにおけるガラクト-ス欠損糖鎖を高精度に検出する手法を開発し、これを用いて、lpr遺伝子リウマチ因子産生惹起マウスの血清中IgGにおける糖鎖異常現象を調べた。まず、我々が開発した糖鎖リモデリング技術を用いて、血清より調製したIgGから蛋白質部分を損なうことなくシアル酸とガラクト-スを除去した。このガラクト-ス欠損IgG(GLーIgG)のレクチンとの反応性を、GLーIgGを固相に不動化したプロテインAに結合させた後、種々のビオチン化レクチンとストレプトアビジンーペルオキシダ-ゼを用いて調べた。その結果、GLーIgGは元のIgGと比較してコンカナバリンA(ConA)などのマンノ-スに親和性を示すレクチンと非常に強く結合することが判明した。そこで、血清中のIgGを固相に不動化したプロテインAに結合させ、そのIgG糖鎖に対するConAの結合をペルオキシダ-ゼの活性を測定することでIgGの糖鎖異常を調べた。その結果、この手法が慢性関節リウマチ患者の血清中IgGのガラクト-ス欠損糖鎖を糖鎖構造解析をした場合と同様に高精度で検出できることを判明した。そこでこの手法を用いて、lpr遺伝子を導入したリウマチ因子を産生しリウマチ様関節炎を発症する自己免疫疾患MRL/lprマウス、リウマチ因子は産生するが疾患は発症しないlpr遺伝子を導入したC3H/lprマウス、リウマチ因子産生も疾患発症もしないそれらの対照マウスMRL/+およびC3H/+の血清中IgGの糖鎖を調べ、対照マウス以外での糖鎖異常を検出した。今後、この確認のためにC3Hマウスの検体数を増やすとともにC3HマウスIgGの糖鎖構造解析が必要であろう。

The presence of IgG in the serum of patients with chronic arthritis In this study, we developed a method for detecting IgG in serum with high accuracy by analyzing the structure of IgG in serum in detail. In addition, we have developed a new technology for the removal of protein from IgG by serum modulation. This is the first time that the IgG(GL-IgG) has been modified. The IgG (GL-IgG) has been modified in the solid phase. The results showed that the IgG affinity of GL-IgG was very strong compared with that of IgG A(ConA). The IgG binding activity in serum was measured by ELISA. The results showed that the IgG in serum of patients with chronic arthritis was detected with high accuracy in the same situation. This technique is used to introduce C3H/lpr gene into the immune system, and to produce IgG in the immune system. The sugar lock exception is detected. In the future, it is necessary to analyze the carbohydrate structure of C3H IgG by increasing the number of C3H IgG molecules.