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転写因子の代謝と転写調節

转录因子代谢和转录调控

基本信息

批准号：
05152031
负责人：
鈴木紘一
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152031/
关键词：
転写因子カルパインカルパスタチンプロテインキナーゼC

项目摘要

転写因子の代謝に及ぼすカルパインの効果を調べるため、カルパイン、特に核に発現するカルパインの性質の解析を行ない次の結果を得た。1)種々の生体試料でカルパインのレベルを測定するため、RT-PCR法によるカルパインのmRNAの定量法を確立した。試料の量に限りが有ることが多いので、間接的ではあるが、カルパインのレベルをmRNA量で推定することにした。これまでに同定したμ、m、μ/mカルパインの大小サブユニット、p94及び、カルパスタチンに対し、特異的な1組のプライマーを設定、合成し、これを用いて行なうRT-PCRの細かい条件を検討して、最適条件を設定した。こうして確立した方法を用いてカルパインが実際に定量出来ることを証明した。2)カルパインと細胞増殖の関係をより明確にする一つの方策として、カルパインのPKCに対する効果を検討した。これまで同定した10種類のPKC分子種はいずれもカルパインによって分解切断され、キナーゼドメインに相当する活性断片を生じた。この活性断片の生成の生理的意義についてはさら討を進めている。3)骨格筋に特異的に発現し、細胞核に存在するカルパイン,p94の解析を行なった。p94はmRNA量は多いが、蛋白質としては殆ど検出されず、僅かに抗体染色で局在が確認出来る。種々のp94のcDNAコンストラクトを細胞で発現させる系を用いて検討した。p94に特異的に存在するIS2がp94の速い分解を規定し、この分解は自己分解であると同定した。p94は筋細胞の分化の最終段階出発現し、MyoDなどの転写因子のレベルを規定することにより細胞分化を制御すると考えられ、さらに詳細に検討している。

The results of the analysis of the metabolism and the effect of the gene expression in the gene expression system were obtained. 1)A quantitative method for the determination of mRNA in biological samples was established by RT-PCR. The amount of sample is limited to the amount of mRNA that can be estimated indirectly. The size of the RT-PCR products is determined by μ, m and μ/m, and the optimal conditions are determined by setting, synthesizing and using the RT-PCR products. The method is to determine the amount of time needed to complete the test. 2) To clarify the relationship between cell culture and cell proliferation, and to discuss the effect of PKC on cell culture. These 10 PKC species were identified as active fragments in the cleavage and cleavage of protein. The physiological significance of the formation of this active fragment 3)The expression of p94 in the cell nucleus was analyzed. p94 mRNA levels are high, protein levels are low, and antibody staining is low. The cDNA sequence of p94 was detected in cells. p94 is a special case of IS2 and p94 decomposition is regulated, and the decomposition is self-decomposition. p94 is the final stage of cell differentiation, MyoD and transcription factor regulation, and cell differentiation control.