無細胞DNA修復系を用いたクロマチン構造に特異的な修復機構の解析

使用无细胞 DNA 修复系统分析染色质结构特异性修复机制

• 批准号: 05772007
• 负责人: 益谷 央豪
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05772007/
• 关键词: DNA除去修復; 無細胞DNA修復系; クロマチン; 色素性乾皮症(XP); コビキチン

1.SV40のミニ染色体を用いた無細胞修復系の分画、再構成哺乳類細胞のDNA修復機構を解析するために、紫外線照射したSV40ミニ染色体を鋳型とする無細胞修復系を用い、細胞抽出液の分画、再構成を試みた。その結果、ホスホセルロースカラムにより分画した3つの画分の全てが修復反応に必要であり、全てにDNA修復因子が含まれていることがわかった。さらに、これらの画分について、ヒトの修復欠損株である色素性乾皮症(XP)細胞抽出液の欠損を相補する活性を検出した。2.クロマチンDNAの修復に必要な因子の同定無細胞修復系の分画、再構成の過程で、XP細胞抽出液の欠損を相補する活性を検出することができたので、まず、これらの因子を同定することを試みた。その結果、XP-C群について、その欠損を相補する因子をほぼ完全に精製することに成功した。XP-C群の欠損を相補する因子(XPCC)は、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動上、125KDaと58KDaの2つのポリペプチドの複合体であることを明らかにした。DNA修復系におけるユビキチン系の関与当研究室で得られたマウスFM3A細胞のユビキチン活性化酵素に変異をもつ温度感受性変異株を用いて修復におけるユビキチン系の関与について調べるために、まず、親株であるFM3A細胞抽出液を調製して反応を行わせた。その結果、ヒトの細胞抽出液ばかりでなくマウスの細胞抽出液の反応も検出できることがわかった。

1. SV40 の ミ を ニ chromosomes with い た cell repair is の painting, not constitute a mammalian cell の DNA repair agency を parsing す る た め に, ultraviolet irradiation し た SV40 ミ ニ chromosome を type where と す る no cells repair department を い, extract の painting, try to constitute を み た. そ の results, ホ ス ホ セ ル ロ ー ス カ ラ ム に よ り points draw し た 3 つ の draw points の full て が repair the 応 に necessary で あ り, whole て に contains DNA repair factor が ま れ て い る こ と が わ か っ た. さ ら に, こ れ ら の draw points に つ い て, ヒ ト の repair owe damage strain で あ る pigment extract dry skin disease (XP) cells の fill owe loss を phase す る active を 検 out し た. 2. ク ロ マ チ ン の DNA repair に な factor の with necessary cell free repair process is の painting, then constitute の で, XP cell extract の fill owe loss を phase す る active を 検 out す る こ と が で き た の で, ま ず, こ れ ら の factor を be す る こ と を try み た. そ の results, XP - group C に つ い て, そ の fill owe loss を phase す る factor を ほ ぼ completely に refined す る こ と に successful し た. XP - C group is の owe loss を fill す る factor (XPCC) は, SDS ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル 気 swimming on, 125 kda と 58 kda の 2 つ の ポ リ ペ プ チ ド の complex で あ る こ と を Ming ら か に し た. DNA repair system に お け る ユ ビ キ チ ン is の masato and when laboratory で ら れ た マ ウ ス FM3A cells の ユ ビ キ チ ン active phenoloxidase に - different を も つ temperature sensitivity - different strains を with い て repair に お け る ユ ビ キ チ ン is の masato and に つ い て adjustable べ る た め に, ま ず, parent strain で あ る FM3A cell extract を modulation し て anti 応 を line わ せ Youdaoplaceholder0. そ の results, ヒ ト の cell extract ば か り で な く マ ウ ス の cell extract の anti 応 も 検 out で き る こ と が わ か っ た.

项目成果

Hiroyuki Kamiya: "Cyclobutane thymine dimers in a ras proto-oncogene hot spct activate the gene by point mutation" Nucleic Acids Research. 21. 2355-2361 (1993)

Hiroyuki Kamiya：“ras 原癌基因热点 spct 中的环丁烷胸腺嘧啶二聚体通过点突变激活该基因”核酸研究。

Chikahide Masutani: "Rinfication and cloning of a mucleotide excision repeir complex involving the xeroderma pigmentosum group C protein and a human homolag of yeast RAD23." EMBO Journal. (in press).

Chikahide Masutani：“涉及着色性干皮病 C 组蛋白和酵母 RAD23 的人类同源物的核苷酸切除重复复合物的冲洗和克隆。”

Kaoru Sugasawa: "Cell-free repair of UV-damaged simian vinis 40 chromosomes in human cell extraxts." Journal of Biological Chemistry. 268. 9098-9104 (1993)

Kaoru Sugasawa：“人类细胞提取物中受紫外线损伤的猿猴 40 号染色体的无细胞修复。”

Chikahide Masutani: "Cell-free repair of UV-damaged simian virus 40 chromosomes in human cell extraxts." Journal of Biological Chemistry. 268. 9105-9109 (1993)

Chikahide Masutani：“人类细胞提取物中受紫外线损伤的猿猴病毒 40 条染色体的无细胞修复。”

Chikahide Masutani: "Rinfication and cloning of a mucleotide excision repeir complex involving the xeroderma pigmentosum group C protein and a human homolag of yeast RAD23." EMBO Journal. (in press). (1994)

Chikahide Masutani：“涉及着色性干皮病 C 组蛋白和酵母 RAD23 的人类同源物的核苷酸切除重复复合物的冲洗和克隆。”