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損傷乗り越え複製後のDNA損傷の修復と娘細胞への分配

克服损伤复制并分配到子细胞后修复 DNA 损伤

基本信息

批准号：
21651020
负责人：
益谷央豪
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagoya University (2010)Osaka University (2009)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

紫外線照射により主に2種類のDNA損傷が生じることが知られている。6-4光産物は、ヌクレオチド除去修復機構により効率よく認識されて比較的速やかに修復される。しかし、シクロブタン型ピリミジン2量体(CPD)は、たいへん修復されにくいことが知られている。本応募者らは、高発癌性遺伝疾患である色素性乾皮症C群の責任遺伝子産物複合体が、6-4光産物の認識において中心的な役割を果たし、ヌクレオチド除去修復に関わること、また、バリアント群の責任遺伝子産物として、ヒトDNAポリメラーゼ・イータ(Polη)を同定し、PolηがCPDを鋳型として乗り越えて複製することを明らかにしてきた。今日までに、転写の妨げとなったDNA損傷を優先的に修復する機構は知られているが、複製と修復の連携機構は知られていない。そこで、本年度は、複製の妨げとなったDNA損傷の修復を検出するための条件を設定するために、細胞周期をG1/S期に同調したヒト細胞に紫外線を照射し、S期の進行をFACSにより調べた。その結果、ヌクレオチド除去修復及びPolηが正常な細胞株では、4J/m2程度の紫外線照射では、S期の進行に顕著な遅延は認められないこと、8J/m2では遅延は認められるものの、最終的にはS期を通過できることを明らかにした。一方で、Polηを欠損した色素性乾皮症バリアント群患者由来の細胞株では、2J/m2の紫外線照射でも顕著なS期の進行遅延が認められた。さらに、DNA複製スライディング・クランプであるPCNAの164番目のリジンをアルギニンに置換したヒト細胞系を構築して検討した結果、この細胞ではPolη欠損細胞と同程度の顕著なS期の進行遅延が認められることを明らかにした。

Ultraviolet radiation によ mainly に2 types of DNA damage が students じるられてとが know られてるる. は 6-4 light products, ヌクレオチド remove repair agency により sharper rate よく know されて relative speed やかに repair される. しかし, シクロブタン type ピリミジン 2 quantity body (CPD) は, たいへん repair されにくいことが know られている. This 応 offering らは, high 発 cancerous heritage 伝 disorders である pigmentary dry skin disease group C の responsibility heritage 伝 zi chan complex が, 6-4 light products の know において center な "を cut fruit たし, ヌクレオチド remove repair に masato わること, また, バリアント group の responsibility heritage 伝 zi chan content として, ヒト DNA ポリメラーゼ · イータ (Pol Eta) をし, Pol eta が CPD を type where として乗り more えて copy することを Ming らかにしてきた. Today までに, planning to write の hinder げとなった DNA damage を priority に repair する institutions は know られているが, duplicate と repair の institutions link-up は know られていない. そこで, this year's は and duplicate の hinder げとなったの DNA damage repair を検 out するためをの conditions set するためをに, cell cycle G1 / S phase に homology したヒト cells にを exposure to the sun's ultraviolet rays し stage, S の were を both FACS により adjustable べた. その results, ヌクレオチド remove repair and び Pol eta がな normal cell lines では, 4 j/m2 の ultraviolet irradiation では stage, S の were に顕 the な遅 delay は recognize められないこと, 8 j/m2 では遅 delay は recognize められるものの, eventually には S period を through できることを Ming らかにした. Side で, Pol eta を owe loss した pigmentary dry skin disease バリアント group of patients with origin の cell lines では, 2 j/m2 の ultraviolet irradiation でも顕 the な S period to 遅の delay が recognize められた. さらに, DNA replication スライディング · クランプである PCNA の 164's mesh のリジンをアルギニンに replacement したヒト cell line を build して beg し検た results, この cells では Pol eta owe と damaged cells with degree の顕 the な S period to 遅の delay が recognize められることを Ming らかにした.