色素性乾皮症蛋白質の無細胞DNA除去修復系および転写系における役割

着色性干皮病蛋白在无细胞 DNA 切除修复和转录系统中的作用

• 批准号: 08264221
• 负责人: 益谷 央豪
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08264221/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; XPC; HHR23B; HHR23A; TFIIH

1)XP-C群細胞抽出液を分画・再構成し、XPC、HHR23B、HHR23Aの3者を、全て含まない無細胞NER系を構築した。この系では、XPC単独では低いNER活性しか示さず、HHR23Bの共存下で、XPCのNER活性が促進された。また、HHR23Bのかわりに、HHR23Aを加えても同様の効果を示した。これらのことから、XPCばかりでなくHHR23BもNERに関与していること、また、HHR23BとHHR23Aは機能的に互換性のある蛋白質であることが示された。2)HeLa細胞より精製したXPC-HHR23B複合体は、一本鎖DNAセルロースカラムに非常に強く結合したことから、DNA結合活性を持つことが示唆された。そこで、ゲルシフト法を用いて、そのDNA結合活性について検討した。XPC-HHR23B複合体は、一本鎖および二本鎖のDNAにともに結合したが、二本鎖DNAにより強く結合した。また、紫外線を照射したDNAにより高い親和性を示したことから、DNA損傷の認識に関与していることが示唆された。3)基本転写因子TFIIHの構成成分の一つであるp62に特異的な抗体を用いて、免疫沈降を行ったところ、ヒトのNERの正常な細胞の抽出液中よりTFIIHとともにXPCが共沈降した。精製したTFIIHとXPC-HHR23Bを用いた実験においても、抗p62抗体によりTFIIHとともにXPC-HHR23Bが共沈降した。さらに、GSTとの融合蛋白質として発現・精製したGST-HHR23Bを用いて、TFIIHとの結合について検討した結果、GST-HHR23BとTFIIHの結合は検出されなかったが、XPCの共存下では、TFIIHがGST-HHR23BおよびXPCとともに共沈降した。これらのことから、TFIIHとXPCが直接相互作用していることが示された。

1) The extract of XP-C group cells is を divided into parts and then reconstituted into three parts: を, XPC, HHR23B, and HHR23A を, all て containing まな を without cellular NER series を construction of た た. こ の is で は, XPC 単 alone で は low い NER active し か shown さ ず, HHR23B の で under the coexistence, XPC の が NER promote さ れ た. Youdaoplaceholder0, HHR23B <s:1> わ わ に に, HHR23Aを plus えて に the same effect を shows を た. こ れ ら の こ と か ら, XPC ば か り で な く HHR23B も NER に masato and し て い る こ と, ま た, HHR23B と HHR23A は functionary に interchangeability の あ る protein で あ る こ と が shown さ れ た. 2) HeLa よ り refined し た XPC - HHR23B complex は, a lock DNA セ ル ロ ー ス カ ラ ム に very strong に く combining し た こ と か ら, DNA binding activity を hold つ こ と が in stopping さ れ た. そ こ で, ゲ ル シ フ を ト method with い て, そ の DNA binding activity に つ い て beg し 検 た. XPC - HHR23B complex は, a lock お よ び 2 lock の DNA に と も に combining し た が, 2 lock DNA に よ り strong く combining し た. ま た, を exposure to the sun's ultraviolet rays し た DNA に よ り い high affinity を shown し た こ と か ら, DNA damage の に masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. 3) basic planning write factor TFIIH の composition の a つ で あ る p62 に specific antibody を な with い て, immune sink を line っ た と こ ろ, ヒ ト の NER の な normal cells の extract in よ り TFIIH と と も に XPC が total sink し た. Refined し た TFIIH と XPC - HHR23B を with い た be 験 に お い て も, p62 antibody に よ り TFIIH と と も に XPC - HHR23B が total sink し た. さ ら に, GST と の fusion protein と し て 発 now, refined し た GST - HHR23B を with い て, TFIIH と の combining に つ い て beg し 検 た results, GST - HHR23B と TFIIH の combining は 検 out さ れ な か っ た が, XPC の coexist under で は, TFIIH が GST - HHR23B お よ び XP Cとと とと に sank to た. こ れ ら の こ と か ら, TFIIH と XPC が direct interaction し て い る こ と が shown さ れ た.

项目成果

Saijo,M.et al.: "Sequential binding of DNA repair proteins RPA and ERCC1 to XPA in vitro" Nucl.Acids Res.24. 4719-4724 (1996)

Saijo,M.et al.：“体外 DNA 修复蛋白 RPA 和 ERCC1 与 XPA 的顺序结合”Nucl.Acids Res.24。

van der Spek,P.J.et al.: "XPC and human homologs of RAD23 : intracellular localization and relationship to other nucleotide excision repair complexes." Nucl.Acids Res.24. 2551-2559 (1996)

van der Spek,P.J.等人：“XPC 和 RAD23 的人类同源物：细胞内定位以及与其他核苷酸切除修复复合物的关系。”

Sugasawa,K.et al.: "HHR23B,a human RAD23 homologue,stimulates XPC protein in nucleotide excision repair in vitro" Mol.Cell.Biol.16. 4852-4861 (1996)

Sugasawa,K.et al.：“HHR23B，一种人类 RAD23 同源物，在体外核苷酸切除修复中刺激 XPC 蛋白”Mol.Cell.Biol.16。

Ito,K.et al.: "c-jun stlmulates origin-dependent DNA unwinding by polyomavirus large T antigen" EMBO J.15. 5636-5646 (1996)

Ito,K.et al.：“c-jun 通过多瘤病毒大 T 抗原刺激起源依赖性 DNA 解旋”EMBO J.15。