ヌクレオソーム構造に特異的なヌクレオチド除去修復機構の解析

核小体结构特有的核苷酸切除修复机制分析

• 批准号: 09771981
• 负责人: 益谷 央豪
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771981/
• 关键词: 色素性乾皮症(XP); ヌクレオチド除去修復; XPC-hHR23B; SV40ミニ染色体; ヌクレオソーム; ヌクレオチド除去修復機構; XPC蛋白質; hHR23蛋白質

sV40のミニ染色体を用いた無細胞ヌクレオチド除去修復系の精製因子による再構成を目指し、昨年度中に、裸のプラスミドDNAを用いた系により明らかにされている既知のヌクレオチド除去修復因子のうち反応の初期過程、即ちDNA鎖の切断までに必要な因子である、XPA、MPC-hHR23B、XPF-ERCC1、XPG、RPA、TFIIHを精製した。本年度は、これらの因子を用いて、反応系を再構成し、その反応機構について明らかにし、さらにヌクレオソーム構造上の損傷に特異的に要求される因子の検索を目的とした。まず、精製因子による再構成を試みたところ、上記の因子により、裸のDNA上における修復反応に比べて効率は低いものの修復反応が再構成された。しかし、粗抽出液を分画して得た画分に比べ、特に、RPAについて、粗抽出液画分よりも精製酵素では、多量の蛋白質を添加する必要があった。この結果より、粗抽出液中には、RPAの活性化、もしくは、RPAと協調的に機能する未同定の因子が存在すると考えられる。現在、この因子の同定を試みている。すでに、我々は、粗抽出液系を用いて、XPC-hHR23B複合体が、ヌクレオチド除去修復反応において最初に損傷DNAを認識する因子であることを示している。そこで、精製酵素による再構成系を用いて、各因子がどのような順番で反応に関与するかを調べた。その結果、XPC-hHR23B複合体が、やはり、最初に必要なこと、続いて、TFIIH複合体が、損傷DNAとXPC-hHR23Bとの複合体上へ導入されることを明らかにした。

SV40 の ミ を ニ chromosomes with い た cell free ヌ ク レ オ チ ド remove repair is の refined factor に よ る reconstitution を refers し, yesterday in the annual に, naked の プ ラ ス ミ ド を DNA with い た department に よ り Ming ら か に さ れ て い る already know の ヌ ク レ オ チ ド remove repair factor の う ち anti 応 の early process, namely ち DNA lock の cut ま で に な necessary factors Youdaoplaceholder0, XPA, mSC-hHR23b, XPF-ERCC1, XPG, RPA, TFIIHを refining た た. This year は, こ れ ら の factor を with い て 応 を constitute し again, and anti そ の に 応 authorities つ い て Ming ら か に し, さ ら に ヌ ク レ オ ソ ー ム の on structure damage に に requirements of specific さ れ る factor の 検 cable を purpose と し た. ま ず, refined factor に よ る constitute を try again み た と こ ろ, written の factor に よ り, naked の DNA に お け る repair the 応 に than べ て sharper rate は low い も の の repair the 応 が reconstitution さ れ た. し か し, crude extract を points draw し て た draw points に than べ, に, RPA に つ い て, crude extract draw points よ り も refining enzyme で は quantity の, protein を add す る necessary が あ っ た. こ の results よ り, crude extract of に は, RPA の activeness, も し く は, RPA と coordination に function す る failed with の factors exist が す る と exam え ら れ る. Now, the <s:1> <s:1> factor <e:1> is the same as を. Try みて る る る. す で に, I 々 は, crude extract を with い て, XPC - hHR23B complex が, ヌ ク レ オ チ ド remove repair the 応 に お い て に initial damage DNA を know す る factor で あ る こ と を shown し て い る. そ こ で, refining enzyme に よ る reconstitution is を with い て, each factor が ど の よ う な shun's で anti 応 に masato and す る か を adjustable べ た. そ の results, XPC - hHR23B complex が, や は り, initially に necessary な こ と, 続 い て, TFIIH complex が, damage DNA と XPC - hHR23B と の on complex へ import さ れ る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Sugasawa,K.et al.: "Two human homologues of Rad23 are functionally interchangeable in complex formation and stimnlation of XPC repair activity." Mol.Cell.Biol.17. 6924-6931 (1997)

Sugasawa, K. 等人：“Rad23 的两种人类同源物在复合物形成和刺激 XPC 修复活性方面可以功能互换。”

Fujiwara,Y.et al.: "Detection,purification and characterization of a protein that binds the (6-4) photoproduct-containing DNA in Hela cells." Nucl.Acids Symp.Ser.37. 277-278 (1997)

Fujiwara,Y.et al.：“在 Hela 细胞中结合含有 (6-4) 光产物的 DNA 的蛋白质的检测、纯化和表征。”

Sugasawa,k.et al.: "Xeroderma pigmentosum group C protein comprex is the initiator of global genome nucleotide excision repair." Mol.Cell. 2. 223-232 (1998)

Sugasawa,k.et al.：“着色性干皮病 C 组蛋白复合物是全基因组核苷酸切除修复的引发剂。”

Kai,M.et al.: "A new Drosophia ultra violet light-damaged DNA recognition endonuclrease that selectively nicks a (6-4) photoproduct site." Biochim.Biophys.Acta. 1397. 180-188 (1998)

Kai,M.等人：“一种新的果蝇紫外线损伤 DNA 识别核酸内切酶，可选择性地切割 (6-4) 光产物位点。”

Masutani,C.et al.: "Identification and characterization of XPC-binding domain of hHR23B" Mol.Cell.Biol.17. 6915-6923 (1997)

Masutani,C.et al.：“hHR23B XPC 结合域的鉴定和表征”Mol.Cell.Biol.17。