標的遺伝子置換を用いたp53遺伝子点突然変異導入マウスの研究

使用靶向基因替换引入小鼠p53基因点突变的研究

• 批准号: 07770152
• 负责人: 中村 健司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770152/
• 关键词: p53; ES細胞; 相同組換え; 点突然変異; 標的遺伝子置換

p53遺伝子は、その変異がヒトの腫瘍から最も頻繁に検出されるがん抑制遺伝子の一つである。多くの種類の腫瘍でp53遺伝子の点変異が見つかることから、単なる遺伝子の欠損だけでなく、特定の点変異が腫瘍の組織特異性を決めている可能性がある。そこで本研究では、p53遺伝子を点突然変異に置き換えたマウスの作成を目標とした。ヒトの腫瘍で最も多く検出されるアミノ酸変異を伴うp53遺伝子の点突然変異は、248番目のアミノ酸がアルギニンからトリプトファンに変異(R248W)したものである。ES細胞に2段目の遺伝子操作を施し、p53遺伝子にR248Wの点突然変異を導入した。第1段階のジーンターゲティングは、選択遺伝子としてNeo遺伝子+Eco-gpt遺伝子を用い、p53遺伝子の第2〜第10エクソンを欠失したES細胞を作成した。つづいて、このp53遺伝子欠損ES細胞を用いて、第2段階目のジーンターゲティングを行い、本研究の目的であるp53遺伝子への点突然変異導入マウスES細胞を作成し、成功した。それぞれのマウス胚盤胞に注入しキメラマウスを得た。さらにキメラマウスを通して、ES細胞由来の変異固体を得た。現在ヘテロマウスを得て、さらにヘテロマウス同士の交配を行っている。本研究にとって最も重要なステップは、ES細胞にp53遺伝子の点突然変異が導入され、しかも、その点突然変異をもつマウスの子孫が得られることである。この目標は、100%達成することができた。今度、得られたマウスにどの様な種類の腫瘍が発生するかを解析し、p53遺伝子における点突然変異と腫瘍発生の組織特異性との関係を追究したい。

p53 The most frequent occurrence of a virus is its suppression. There are many kinds of tumor, p53 gene point differences, and the possibility of tumor tissue specificity is very high. This research aims to create changes in the p53 gene due to sudden changes. The most common type of tumor is found in the p53 gene, and the most common type of tumor is found in the p248 gene. ES cell 2-segment gene manipulation, p53 gene R248W point mutation introduced The first stage of the gene selection process, the Neo gene + Eco-gpt gene selection process, the p53 gene selection process, and the second to tenth stage of the gene selection process were performed. In the process of using this p53 gene to damage ES cells, and in the second step of the project, the purpose of this study is to introduce the p53 gene into ES cells suddenly and successfully. The blastoderm cells were injected into the brain. The origin of ES cells is different. Now it's time for you to mate. In this study, the most important thing is that ES cells have p53 gene mutation, which is introduced into ES cells. The goal is 100% achieved. Today, we have analyzed the occurrence of various types of tumors in the past, and investigated the relationship between sudden changes in the p53 gene and the tissue specificity of tumor development.

项目成果

Gondo Y.,et.al.: "Gene replacement of the p53 gene with the lacZ gene in mouse embryonic stem cells and mice by using two steps of homologous recombinaton." Biochem Biophys Res Commun. 202. 830-837 (1994)

Gondo Y.,et.al.：“通过使用两步同源重组，在小鼠胚胎干细胞和小鼠中用 lacZ 基因替换 p53 基因。”