卵巣腫瘍の遺伝子治療に関する基礎的検討

卵巢肿瘤基因治疗的基础研究

• 批准号: 07771339
• 负责人: 柳沼 裕二
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771339/
• 关键词: 卵巣癌; 癌抑制遺伝子; 遺伝子治療

正常胎盤組織からtotal RNAを抽出し、oligo (dt) cellulose span columnを用いてpoly (A) +RNAを精製し、Molony murine Leukemia Virus Reverse Transcriptaseにより、cDNAを合成した。それを鋳型としてp53,p16^<INK4>,p15^<INK4B>遺伝子の全コーディング領域が各々含まれるようなPCR primerを用いて遺伝子導入するDNAを作成した。各々のフラグメントは塩基配列が目的のものであることをシークエンスにより確認した。この正しい塩基配列を持ったp53,p16^<INK4>,p15^<INK4B>遺伝子のcDNAフラグメントを制限酵素(XhoI,BamHI)にて切断後、同一の酵素で切断した発現ベクターpMSGへ、T4DNA ligaseにより組み込み、さらに大腸菌へ感染させ大量のDNAを得た。次に癌抑制遺伝子p53およびCDK4inhibitorであるp16^<INK4>,p15^<INK4B>遺伝子の発現が見られない卵巣癌細胞株SKOV-3に上述のcDNAフラグメントをリポフェクチン法により細胞株へ導入し、導入された細胞株のクローンをHAT selectionにて選別中である。現在までに癌抑制遺伝子p53を導入した細胞の100個以上のクローンより導入した遺伝子が正しく発現しているクローンを12株得られた。それらのクローンを用いてp53遺伝子の発現を誘導してやると卵巣癌細胞株の増殖が抑制されることが証明された。この事実から癌抑制遺伝子p53に異常のある卵巣癌ではその機能を正常に戻すことが遺伝子治療に応用できる可能性が証明された。今後これらのクローンを用いて卵巣癌における癌抑制遺伝子p53の機能を詳細に検討すると共にCDK4inhibitorであるp16^<INK4>,p15^<INK4B>遺伝子でもその卵巣癌細胞株における機能解明のためにクローンの選別中である。

Normal fetal tissue samples were total RNA extractive, oligo (dt) cellulose span column, poly (A) + RNA semen, Molony murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase, cDNA. The whole PCR primer of the lt;INK4B> family is made of p53, p16 ^ & lt;INK4B> p15 ^, which contains the data of the DNA. In each case, the purpose of the arrangement is to make sure that it is confirmed. After cutting off the cDNA restriction enzyme (XhoI,BamHI), the same enzyme was cut off and the same enzyme was cut off. PMSG was detected, T4DNA ligase was isolated, and large amounts of DNA were detected. The second cancer suppressor gene p53, CDK4inhibitor gene p16 ^ & lt;INK4>, p15 ^ & lt;INK4B> cell line SKOV-3, the above-mentioned cDNA cell line, and cell line. At present, the cancer suppressor p53 gene was transferred into the cells of more than 100 pregnant women, and 12 strains of them were found to be successful. The p53 gene was used to detect the expression of p53 gene in the cell line of ovary cancer. The cancer suppressor gene p53 gene is often used in the treatment of ovarian cancer. The possibility of the treatment of ovarian cancer is clear. In the future, we will be able to use the tumor suppressor gene p53 to detect the accuracy of CDK4inhibitor gene p16 ^ & lt;INK4>, p15 ^ & lt;INK4B> cell line cancer cell line screening machine to determine whether or not you have been selected.