がん遺伝子導入ヒト上皮細胞の癌化とアポトーシスにおけるシグナル伝達機構の解析

转染癌基因的人上皮细胞癌变和凋亡的信号转导机制分析

• 批准号: 08670521
• 负责人: 中野 修治
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670521/
• 关键词: がん遺伝子; アポトーシス; シグナル伝達; Focal Adhesion Kinase; rac; rho; 足場依存性喪失; Srcチロシンキナーゼ; ras; 癌遺伝子; アポートーシス; srcチロジンキナーゼ

正常上皮細胞が増殖するには基質への接着が必要であり、接着を阻止されるとアポトーシスにより細胞死を起こす。これに反し癌細胞は浮遊状態にしてもアポトーシスは起こらないことが特徴であり、この現象は足場依存性喪失とよばれ分子機序は不明のままである。我々はヒト細胞の癌化とアポトーシスの関連を解析するため、HAG-1細胞にシグナル伝達の要である活性型Ras,v-Srcを導入し、癌化とアポトーシスについて解析した。この細胞は活性化Rasでは癌化せず、Srcでのみ癌化し、同時に浮遊状態におけるアポトーシスも誘導されなかった。このv-srcによるアポトーシス回避の機序を、Src下流のシグナル分子との関連で解析した。v-src導入細胞ではインテグリンと細胞骨格蛋白との間に介在するFocal Adhesion Kinase(FAK)の恒常性のチロシンリン酸化がみられ、またsrcチロシンリン酸化阻害剤であるハービマイシンAで処理するトFAKのリン酸化の阻害とともにアポトーシスが誘導された。更にFAKのアンチセンスでアノイキスが誘導されることを確認し、SrcによるFAKのチロシンリン酸化とアノイキス抵抗性に深い関連があることを見出した(J.Cell Biol.投稿中)。更にアデノウイルスベクターに組み込んだdominant negative RasでRas機能を抑制すると造腫瘍性が消失したため、癌化には活性型rasのみでは癌化出来ないが、v-srcによる癌化にはRas機能が必要であることがわかった。最近Ras下流のsmall GTP蛋白であるRac/Rhoが細胞の形質転換、細胞接着、細胞遊走能、接触阻害の解除、などを制御していることがわかり、細胞の癌化にこのRac/Rhoの機能が関与していることが示唆されたため、アデノウイルスベクターに組み込んだDominant negative RacでRac機能を抑制したところ、v-srcで癌化したHAG-1細胞の遊走能と浸潤能が抑制され、造腫瘍性も完全に消失した。このためv-srcによる癌化におけるRac機能の重要性が初めて示唆された。src下流のphosphatidylinositol-3 kinase(Pl-3 kinase)阻害剤であるWortmanninでv-src導入細胞の浸潤能が低下したため、Pl-3 kinaseもSrcによる癌化に関与している可能性がある。今後はRac機能とアポトーシスの関連を解析する。

Normal epithelial cells が raised colonization す る に は matrix へ の then が necessary で あ り, then を prevent さ れ る と ア ポ ト ー シ ス に よ り cell death を こ す. こ れ に anti し cancer は floating state に し て も ア ポ ト ー シ ス は up こ ら な い こ と が, 徴 で あ り, こ の phenomenon は full loss of field dependence と よ ば れ unknown molecular machine sequence は の ま ま で あ る. I 々 は ヒ の ト cell cancerization と ア ポ ト ー シ ス の masato even を parsing す る た め, HAG - 1 cell に シ グ ナ ル 伝 の wanna で あ る Ras activity type, v - Src を import し, canceration と ア ポ ト ー シ ス に つ い て parsing し た. は こ の cell activation of the Ras で は canceration せ ず, Src で の み canceration し, at the same time に floating state に お け る ア ポ ト ー シ ス も induced さ れ な か っ た. <s:1> <s:1> v-srcによるアポト シス シス avoid <s:1> sequence を, downstream <s:1> シグナ た elements of Src と <s:1> relationship で analysis た. v-src is introduced into cells and the に interface between で で <s:1> テグリ テグリ テグリ と と と と と and the bone proteins of と are present at するFocal Adhesion Kinase (FAK () の constancy の チ ロ シ ン リ ン acidification が み ら れ, ま た SRC チ ロ シ ン リ ン acidification resistance against tonic で あ る ハ ー ビ マ イ シ ン A で 処 Richard す る ト FAK (の リ ン acidification の resistance against と と も に ア ポ ト ー シ ス が induced さ れ た. More に FAK (の ア ン チ セ ン ス で ア ノ イ キ ス が induced さ れ る こ と を confirm し, Src に よ る FAK (の チ ロ シ ン リ ン acidification と ア ノ イ キ ス resistance に deep い masato even が あ る こ と を shows し た (John casteen ell Biol. Submission in progress. More に ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に group み 込 ん だ dominant negative Ras で Ras function を inhibit す る と made swollen sores sex が disappear し た た め, canceration に は type active Ras の み で は canceration out な い が, v - SRC に よ る canceration に は Ras function が necessary で あ る こ と が わ か っ た. Recently, Ras has been downsizing GTP protein made で あ る Rac/Rho の が cells form quality planning can then change, cell, wander, contact resistance against の lift, な ど を suppression し て い る こ と が わ か り, cell の carcinoma に こ の Rac/Rho の function が masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た た め, ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に group み 込 ん だ Dominant Function of negative Rac で Rac を inhibit し た と こ ろ, v - SRC で canceration し た HAG の wander can と - 1 cell infiltrate can suppress さ が れ, swollen sores sex も に disappear completely し た. <s:1> ためv-srcによる carcinogenesis におけるRac function <e:1> importance が initial めて hint された. SRC obscene の phosphatidylinositol 3 kinase (Pl - 3 kinase) resistance against tonic で あ る Wortmannin で v - SRC の import cell infiltrate can lower が し た た め, Pl - 3 kinase も SRC に よ る canceration に masato and し て い る possibility が あ る. In the future, the <s:1> Rac function とアポト, シス and <s:1> related を analysis する.

项目成果

Kosei Moriyama et al: "Hepatitis GB virus C genome in the serum of aplastic anemia patients receiving frequent blood transfusions" British Journal of Haematology. 96(in press). (1997)

Kosei Moriyama 等人：“频繁输血的再生障碍性贫血患者血清中的 GB 型肝炎病毒 C 基因组”英国血液学杂志。

Y.Murakami: "Constitutive activation of Jak-2 and Tyk-2 in v-Src-transformed HAG-1 human cells" Journal of Cellular Physiology. (in press). (1998)

Y.Murakami：“v-Src 转化的 HAG-1 人类细胞中 Jak-2 和 Tyk-2 的组成型激活”《细胞生理学杂志》。

H.Fujishima: "IFN alpha and gamma inhibit the neoplastic potential of v-src-transformed cells" International Journal of Cancer. (in press). (1998)

H.Fujishima：“IFN α 和 γ 抑制 v-src 转化细胞的肿瘤潜力”国际癌症杂志。

T.Kanaji: "Molecular and Genetic analysis of 2 patients with Bernard-Soulier syndrome" Thrombosis and Haemostasis. 77. 1055-1061 (1997)

T.Kanaji：“2 例 Bernard-Soulier 综合征患者的分子和遗传学分析”血栓和止血。

Hidesuke Fukazawa et al.: "Inhibitors of anchorage-independent growth affect the growth of transformed cells on poly HEMA-coated surfaces" International Journal of Cancer. 67. 876-882 (1996)

Hidesuke Fukazawa 等人：“锚定非依赖性生长的抑制剂影响转化细胞在聚 HEMA 涂层表面上的生长”国际癌症杂志。