3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼの反応機構

3-甲基腺嘌呤DNA糖基化酶的反应机理

• 批准号: 07224205
• 负责人: 山縣 ゆり子
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07224205/
• 关键词: DNA修復酵素; 3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼ; X線結晶構造解析; 酵素反応機構

大腸菌3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼIIは、強力な突然変異、致死作用を有するアルキル化剤によるDNA損傷のうち、主にN-メチルプリン塩基を除去し、生命の維持に働くDNA修復酵素であるが、酵素反応機構はもちろん、活性部位、並びに、3次元レベルでの構造研究については、全く報告がなかった。申請者は本酵素のX線構造回析を行ない、2.3A分解能の3次元構造を得た。本研究は、本酵素の3次元構造をもとに、活性部位を決定し、ラウエ法でグリコシラーゼ反応機構を解明するための基礎的データを得ることを目的としているが、本年度は以下の成果を得た。(1)部位特異的突然変異誘発法を利用して(変異遺伝子については九大関口睦夫教授から提供を受けた)3次元構造から推定した活性残基を部位特異的に変換した変異蛋白質を調製し、各変異蛋白質の酵素反応を調べ、活性残基をAsp238と同定した。さらに、Trp218が基質認識に重要であることが示唆された。(2)コンピューターグラフィックスを利用し、DNA基質との相互作用モデルを提案、基質アナログ-TagII複合体結晶作成に適したDNAオリゴマーの鎖長を決め、DNAオリゴマー合成可能な3-メチル、3-デアザ-9-デアゼプリンを含む基質DNAオリゴマーを合成している。(3)ヒトリゾチーム変異型結晶を用いて、高エネルギー物理研究所でラウエ法によるデータ収集、データ処理法を修得した。

Coliform 3 - メ チ ル ア デ ニ ン DNA グ リ コ シ ラ ー ゼ は II, powerful な suddenly - vision, lethal effect を have す る ア ル キ ル the tonic に よ る DNA damage の う ち, main に N - メ チ ル プ リ ン salt base を remove し, life の maintain に 働 く DNA repair enzyme で あ る が, enzyme reverse 応 は も ち ろ ん, active site, and び に, 3 times Meta-レ ベ レベ で で で <s:1> structural study に レベ て て, full く report がな った. The applicant 's <s:1> X-ray structure analysis of this enzyme を rows な を and 2.3A decomposition of the <s:1> three-dimensional structure を results in た. This study は, this enzyme の 3 dimensional structure を も と に, active site を decided し, ラ ウ エ method で グ リ コ シ ラ ー ゼ を 応 authorities interpret す る た め の based デ ー タ を must る こ と を purpose と し て い る が, below this year's は の を た. (1) site specific sudden variations of different induced 発 を using し て (- different heritage 伝 son に つ い て は nine masato mouth between professor か ら provide を by け た) three yuan structure か ら presumption し た active residue を site specific に variations in し た - different protein を し modulation, each - different protein の enzyme reverse 応 を べ, active residue を Asp238 と with fixed し た. Youdaoplaceholder0, Trp218が matrix recognition に important である された とが hints された. (2) コ ン ピ ュ ー タ ー グ ラ フ ィ ッ ク ス を using し, DNA substrate と の interaction モ デ ル を proposal, matrix ア ナ ロ グ - TagII complex crystal made に optimum し た DNA オ リ ゴ マ ー の lock long を め and DNA オ リ ゴ マ ー synthesis can be three - メ な チ ル, 3 - デ ア ザ - 9 - デ ア ゼ プ リ ン を containing DNA オ む matrix Youdaoplaceholder0 リゴ を を を synthesize て る る. (3) ヒ ト リ ゾ チ ー ム - different crystallization を with い て, high エ ネ ル ギ ー institute of physics で ラ ウ エ method に よ る デ ー タ 収 set, デ ー タ 処 logos を mend し た.

项目成果

Bai, L., et al.: "Shanciol, A Dihydrophenanthropyran from Pleione bulbocodioides" Phytochem.41. 625-628 (1996)

Bai, L., 等人：“Shanciol，一种来自 Pleionebulbocodioides 的二氢菲喃”Phytochem.41。

Katagi, T., et al.: "Syntheses and Anti-inflammatory Activities of O-Acyloximes" Chem. Pharm. Bull.44. 145-149 (1996)

Katagi, T. 等人：“O-酰基肟的合成和抗炎活性” Chem。

Yamagata, Y., et al.: "Model Building of DNA Repair Enzyme 3-Methyladenine DNA Glycosylase-DNA Complex" Nucleic Acids Symp.Ser.34. 7-8 (1995)

Yamagata, Y., et al.：“DNA 修复酶 3-甲基腺嘌呤 DNA 糖基化酶-DNA 复合物的模型构建”核酸 Symp.Ser.34。

Takano, K., et al.: "Contribution of Hydrophobic Residues to the Stability of Human Lysozyme: Calorimetric Studies and X-ray Structural Analysis" J. Mol. Biol.254. 62-76 (1995)

Takano, K. 等人：“疏水残基对人类溶菌酶稳定性的贡献：量热研究和 X 射线结构分析”J. Mol。