Eph受容体型チロシンキナーゼの神経回路形成における機能解析

Eph受体酪氨酸激酶在神经回路形成中的功能分析

• 批准号: 10171226
• 负责人: 田中 英明
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10171226/
• 关键词: 運動ニューロン; ニワトリ胚; Eph; 受容体型チロシンキナーゼ; ephrin

我々はこれまでに、Eph受容体型チロシンキナーゼEphA3、EphA4がニワトリ胚運動ニューロンのサブタイプ特異的に、また発生過程に一過性に発現し、Ephファミリーのリガンドephrin-A2、ephrin-A5によりその軸索成長が阻害されることを見出し、これらのEph関連分子の生体内での機能を解析するため、機能阻害抗体を開発した。これらの機能阻害活性を持つ抗EphA4抗体#16と抗ephrin-A2抗体B3のエピトープを決定するために、それぞれのcDNAを用い、PCRにより部分cDNAをクローニングし、293細胞に発現させ細胞の免疫染色と培養上清のイムノブロットで解析した。その結果、抗EphA4抗体はシステインリッチ部分のほぼ中央、抗ephrin-A2抗体B3はN末端近くの約40アミノ酸にエピトープが存在することが明らかになり、さらに領域を小さくして解析中である。さらに、Ephファミリーは神経系以外にも様々な部位で発現されている。EphA4は形成直前、直後の体節に強く発現されているため、Newの培養法を用いて、機能阻害抗EphA4抗体をst9-13のニワトリ胚全体に投与した。体節形成そのものには変化が見出せなかったが、機能阻害抗体に曝露することにより胚全体の抗EphA4抗体染色性が消失した。この場合、in situハイブリダイゼーションでは強くシグナルが検出されたことから、細胞は生存しながらも蛋白発現が低下していると考えられた。機能阻害活性を持たない抗体ではこのようなことは生じないことから、リガンドとの相互作用によるEph受容体の安定性などに関与する現象を反映していると考えられ、さらに詳細な解析を継続している。

I 々 は こ れ ま で に, Eph capacity size チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ EphA3, EphA4 が ニ ワ ト リ embryo movement ニ ュ ー ロ ン の サ ブ タ イ プ specific に, ま た 発 に birth process transient に 発 し, Eph フ ァ ミ リ ー の リ ガ ン ド ephrin A2, ephrin A5 に よ り そ の axon growth が resistance against さ れ Youdaoplaceholder0 とを とを とを reveals the <s:1> and <s:1> れら <s:1> eph-related molecules <e:1> in vivo で <s:1> function を analysis するため functional inhibitory antibody を development た. こ れ ら の function resistance against active を hold つ resistance EphA4 antibodies # 16 と ephrin resistance - A2 B3 の エ ピ ト ー プ を decided す る た め に, そ れ ぞ れ の cDNA を い, PCR に よ り partial cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し, 293 cells に 発 now さ せ cell の immune dyeing と culture supernatant の イ ム ノ ブ ロ ッ ト で solution Analyze the た. そ の results, resisting EphA4 antibody は シ ス テ イ ン リ ッ チ part の ほ ぼ central, resisting ephrin B3 - A2 antibody は N terminal near く の about 40 ア ミ ノ acid に エ ピ ト ー プ が exist す る こ と が Ming ら か に な り, さ ら に field を small さ く し て in parsing で あ る. Youdaoplaceholder0, Ephファ, ファ, リ, されて, る. Similar to に, 々な parts outside the nervous system で, されて, る, る. EphA4 は formation ahead, straight after の somite に strong く 発 now さ れ て い る た め, New の culture method を with い て, functional resistance against anti EphA4 antibody を st9-13 の ニ ワ ト リ embryo all に cast and し た. Somite forming そ の も の に は - turn out が せ な か っ た が に exposure, functional resistance against antibody す る こ と に よ り embryo all の EphA4 antibody staining resistance が disappear し た. こ の occasions, the in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン で は strong く シ グ ナ ル が 検 out さ れ た こ と か ら は, cell survival し な が ら も low protein 発 now が し て い る と exam え ら れ た. Functional resistance against active を hold た な い antibody で は こ の よ う な こ と は raw じ な い こ と か ら, リ ガ ン ド と の interaction に よ る Eph の stability by let body な ど に masato and す る を reflects し て い る と exam え ら れ, さ ら に detailed analytical を な 継 続 し て い る.

项目成果

Wada Naoyuki: "Glycosylphosphatidylinositol-anchored cell surface affinity in the limb bud." Developmental Biology. 202・2. 244-252 (1998)

和田直之：“肢芽中的糖基磷脂酰肌醇锚定细胞表面亲和力。” 202・2（1998）。

Hirano Shigeki: "Normal ontogenic observations on the expression of Eph receptor tyrosine kinase,Cek8,in chick embryos." Anatomy & Embryology. 197・3. 187-197 (1998)

Hirano Shigeki：“鸡胚胎中 Eph 受体酪氨酸激酶 Cek8 表达的正常个体发育观察”197・3（1998）。