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四肢の運動ニューロン特異的神経回路形成機構

四肢运动神经元特异性神经回路形成机制

基本信息

批准号：
10156232
负责人：
田中英明
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10156232/
关键词：
運動ニューロンニワトリ胚 Eph 受容体型チロシンキナーゼ ephrin

项目摘要

我々はこれまでに、Eph受容体型チロシンキナーゼEphA3、EphA4がニワトリ胚運動ニューロンのサブタイプ特異的に、また発生過程に一過性に発現し、Ephファミリーのリガンドephrin-A2、ephrin-A5によりその軸索成長が阻害されることを見出し、これらのEph関連分子の生体内での機能を解析するため、機能阻害抗体を開発した。これらの機能阻害活性を持つ抗EphA4抗体と抗ephrin-A2抗体のエピトープを決定するために、それぞれのcDNAを用い、PCRにより部分cDNAをクローニングし、293細胞に発現させ細胞の免疫染色と培養上清のイムノブロットで解析した。その結果、抗EphA4抗体はシステインリッチ部分のほぼ中央、抗ephrin-A2抗体B3はN末端近くの約40アミノ酸にエピトープが存在することが明らかになり、さらに領域を小さくして解析中である。さらに、阻害抗体の作用を解析する基礎として腰部運動ニューロンと後肢筋における受容体EphA3とEphA4、リガンドephrin-A2とephrin-A5の発現分布を免疫染色により詳細に解析した。運動ニューロンには全体にEphA4が先に発現され、EphA3は極一部の運動ニューロンに発現される。運動ニューロンにはまたリガンドephrin-A2とephrin-A5のmRNAの発現が観察されていたが、蛋白レベルでも弱いながら発現が観察された。一部の筋の筋周膜と神経線維には受容体EphA3とEphA4、リガンドephrin-A2とephrin-A5共に発現されていた。

Eph receptor-specific gene expression, development of a transient gene expression, development of an axonal growth inhibition gene expression, development of a functional inhibition gene expression, and development of an in vivo gene expression inhibitor. The functional inhibition activity of the anti-EphA4 antibody and the anti-Ephrin-A2 antibody was determined by PCR and analysis of some cDNA from 293 cells. The results showed that anti-EphA4 antibody was present in the middle of the protein domain, and anti-Ephrin-A2 antibody B3 was present in the middle of the protein domain near the N-terminal of the protein domain. The basic analysis of the role of the anti-inflammatory antibodies in the lumbar motor and hindlimb muscles was performed. The distribution of the receptors EphA3, EphA4, Ephrin-A2 and Ephrin-A5 was analyzed in detail by immunostaining. EphA4 is the first to appear in the movement, EphA3 is the first to appear in the movement. The expression of mRNA of ephrin-A2 and ephrin-A5 in the expression of protein was observed. A part of the tendon's peritendon membrane and nerve line dimensions are found in the receptors EphA3 and EphA4, and the ligands ephrin-A2 and ephrin-A5.