造血幹細胞のアポトーシスを制御する転写調節機構の解明

阐明控制造血干细胞凋亡的转录调控机制

• 批准号: 10181223
• 负责人: 稲葉 俊哉
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10181223/
• 关键词: サイトカイン; アポトーシス; 骨髄初代培養; bcr-abl; CML; 造血前駆細胞

サイトカイン依存性アポトーシス制御システムの解明は当研究室の中心的研究課題であって、長年にわたり多くの研究室との共同研究で継続的に検討を進めているものである。本年度は特に幹細胞・未分化造血前駆細胞に焦点をあて、実験系の作成を試みた。国内外の、幼弱な造血細胞由来であるとされている細胞株を集めて実験系の構築を試みたが、不首尾に終わった。そこで、骨髄初代培養細胞を直接分析に用いることを検討した。従来の方法では10^5個オーダーの細胞数を得るのが限界であり、細胞生物学的および分子生物学的な分析に必要な、10^6個オーダーの細胞が確保できないことが難点であった。この問題を解決するために、骨髄初代培養に用いるサイトカインの組合わせと濃度、無血清培養液の組成を最適化するとともに、細胞純化法についても改良を重ねた結果、マウス10匹から10^7個オーダーの未分化造血前駆細胞(c-Kit^+,Lin^<lo/->)、50万個程度の初期未分化前駆細胞(Scal^+,c-Kit^+,Lin^<lo/->)の単離に成功した。そこで正常マウスと、共同研究者の本田浩章博士らが樹立したCMLを必発するBcr-Ablトランスジェニックマウスを用いて、未分化前駆細胞の細胞動態の分析を行った。その結果、初期未分化前駆細胞(Scal^+)はサイトカイン欠乏下で細胞分裂が停止し、分化することなく速やかにアポトーシスに陥る。後期の前駆細胞では、サイトカイン欠乏時に多くの細胞がアポトーシスを逃れ成熟細胞まで分化する。このことから、初期の未分化細胞では、サイトカインによる造血量の調節が行われている可能性が示唆された。一方、Bcr-Ablマウス由来の初期骨髄未分化細胞も速やかに細胞周期が停止するが、一部の細胞はアポトーシスを逃れて成熟した顆粒球や単球にまで分化する。この現象はCML発症機序の少なくともひとつの側面を示すものと考えられた。このような細胞生物学的な振舞いを規定する分子レベルの検討が、次年度の課題である。

阐明细胞因子依赖性凋亡控制系统是我们实验室的一个中心研究主题，多年来一直在与许多实验室合作调查此问题。今年，我们试图创建一个实验系统，专注于干细胞和未分化的造血祖细胞。我们试图通过收集据信来自日本和国外的年轻，弱造血细胞而得出的细胞系来建立一个实验系统，但已成功完成。因此，我们研究了原代骨髓培养的细胞进行直接分析。常规方法的限制是在10^5的阶面获得许多细胞，而缺点是无法以10^6的顺序固定细胞，这对于细胞生物学和分子生物学分析是必不可少的。 To solve this problem, we optimized the combination and concentration of cytokines used in primary bone marrow culture and the composition of serum-free culture medium, and improved the cell purification method, and successfully isolated 10^7 undifferentiated hematopoietic progenitor cells (c-Kit^+, Lin^<lo/->) and about 500,000 early undifferentiated progenitor cells (Scal^+, c-Kit^+,来自10只小鼠的lin^<lo/ - >）。因此，对未分化的祖细胞的细胞动力学分析了共同研究员Honda Hiroaki博士等发射CML的正常小鼠和BCR-ABL转基因小鼠。结果，早期未分化的祖细胞（Scale^+）是细胞因子缺乏症，并且迅速成为凋亡而没有分化。在晚期祖细胞中，在细胞因子缺乏期间，许多细胞逃脱了凋亡并与成熟细胞区分开。这表明在早期未分化的细胞中，造血剂的量可能受细胞因子的调节。另一方面，源自BCR-ABL小鼠的早期髓样未分化的细胞也迅速阻止了细胞周期，但是一些细胞逃脱了凋亡并分化为成熟的颗粒细胞和单核细胞。人们认为这种现象至少代表了CML发展机制的至少一个方面。定义这种细胞生物学行为的分子水平研究将是下一个财政年度的挑战。

项目成果

Inukai T.: "The AD1 and AD2 transactivation domains of E2A are essential for the antiapoptotic activity of the E2A-HLF chimeric oncoprotein." Mol.Cell.Biol.18. 6035-6043 (1998)

Inukai T.：“E2A 的 AD1 和 AD2 反式激活结构域对于 E2A-HLF 嵌合癌蛋白的抗凋亡活性至关重要。”