造血幹細胞のアポトーシスを制御する転写調節機構の解明

阐明控制造血干细胞凋亡的转录调控机制

• 批准号: 10181223
• 负责人: 稲葉 俊哉
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10181223/
• 关键词: サイトカイン; アポトーシス; 骨髄初代培養; bcr-abl; CML; 造血前駆細胞

サイトカイン依存性アポトーシス制御システムの解明は当研究室の中心的研究課題であって、長年にわたり多くの研究室との共同研究で継続的に検討を進めているものである。本年度は特に幹細胞・未分化造血前駆細胞に焦点をあて、実験系の作成を試みた。国内外の、幼弱な造血細胞由来であるとされている細胞株を集めて実験系の構築を試みたが、不首尾に終わった。そこで、骨髄初代培養細胞を直接分析に用いることを検討した。従来の方法では10^5個オーダーの細胞数を得るのが限界であり、細胞生物学的および分子生物学的な分析に必要な、10^6個オーダーの細胞が確保できないことが難点であった。この問題を解決するために、骨髄初代培養に用いるサイトカインの組合わせと濃度、無血清培養液の組成を最適化するとともに、細胞純化法についても改良を重ねた結果、マウス10匹から10^7個オーダーの未分化造血前駆細胞(c-Kit^+,Lin^<lo/->)、50万個程度の初期未分化前駆細胞(Scal^+,c-Kit^+,Lin^<lo/->)の単離に成功した。そこで正常マウスと、共同研究者の本田浩章博士らが樹立したCMLを必発するBcr-Ablトランスジェニックマウスを用いて、未分化前駆細胞の細胞動態の分析を行った。その結果、初期未分化前駆細胞(Scal^+)はサイトカイン欠乏下で細胞分裂が停止し、分化することなく速やかにアポトーシスに陥る。後期の前駆細胞では、サイトカイン欠乏時に多くの細胞がアポトーシスを逃れ成熟細胞まで分化する。このことから、初期の未分化細胞では、サイトカインによる造血量の調節が行われている可能性が示唆された。一方、Bcr-Ablマウス由来の初期骨髄未分化細胞も速やかに細胞周期が停止するが、一部の細胞はアポトーシスを逃れて成熟した顆粒球や単球にまで分化する。この現象はCML発症機序の少なくともひとつの側面を示すものと考えられた。このような細胞生物学的な振舞いを規定する分子レベルの検討が、次年度の課題である。

サ イ ト カ イ ン dependency ア ポ ト ー シ ス suppression シ ス テ ム の interpret は when laboratory の central research topic で あ っ て, perennial に わ た り more く の laboratory と の joint research で 継 続 of に beg を 検 into め て い る も の で あ る. This year, に special に stem cells · undifferentiated pre-hematopoietic 駆 cells に focus をあて and laboratory line に were used to make を tests みた. の both at home and abroad, indecisive な hematopoietic cell origin で あ る と さ れ て い る cell lines を set め て be 験 is の build を try み た が, fore and aft に eventually わ っ た. Youdaoplaceholder0 とを検 で で, direct analysis of the primary culture cells of bone marrow を に, and <s:1> る とを検 とを検 とを検 to obtain た. 従 to の way で は 10 ^ 5 オ ー ダ ー の cell number を must る の が limit で あ り, cell biology お よ び に necessary な な analysis of molecular biology, 10 ^ 6 オ ー ダ ー の cells が ensure で き な い こ と が difficulties で あ っ た. こ の を solve す る た め に, bone marrow and original culture に with い る サ イ ト カ イ ン の combination わ せ と concentration, serum-free culture medium of の を optimization す る と と も に, cell purification method に つ い て も improved を heavy ね た results, マ ウ ス 10 horse か ら 10 ^ 7 オ ー ダ ー 駆 before の undifferentiated hematopoietic cells (c - Kit ^ +, Lin ^ < lo / - >), 500000 degree 駆 before early の undifferentiated cells (Scal ^ +, c - Kit ^ +, Lin ^ < lo / - >) の 単 from に successful し た. Normal マ そ こ で ウ ス と, common researchers Dr の this chapter iwade ら が set し た CML を will 発 す る Bcr - Abl ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を with い て の 駆 before, undifferentiated cells line dynamic の を っ た. そ の 駆 before early results, undifferentiated cells (Scal ^ +) は サ イ ト カ イ ン owe lack が stop し で cell division and differentiation under す る こ と な く speed や か に ア ポ ト ー シ ス に 陥 る. 駆 cells before late の で は, サ イ ト カ イ ン spent owed more than に く の cells が ア ポ ト ー シ ス を れ adult cells escape ま で す differentiation る. こ の こ と か ら, initial の undifferentiated cells で は, サ イ ト カ イ ン に よ の る hematopoietic quantity adjustment line が わ れ て い が る possibility in stopping さ れ た. One party, the Bcr - Abl マ ウ ス origin の early bone marrow undifferentiated cells も speed や か に cell cycle が stop す る が, a の cell は ア ポ ト ー シ ス を fled れ て mature し た particles ball や 単 ball に ま で す differentiation る. The <s:1> <s:1> phenomenon the pathogenesis of CML is less なくと ひと ひと ひと <s:1> side を shows す と と examination えられた. The な zhenwu <s:1> を of <s:1> ような cell biology stipulates that する molecules レベ 検 検 検 discuss が and the <s:1> project of the next year である.

项目成果

Inukai T.: "The AD1 and AD2 transactivation domains of E2A are essential for the antiapoptotic activity of the E2A-HLF chimeric oncoprotein." Mol.Cell.Biol.18. 6035-6043 (1998)

Inukai T.：“E2A 的 AD1 和 AD2 反式激活结构域对于 E2A-HLF 嵌合癌蛋白的抗凋亡活性至关重要。”