Biochemische Charakterisierung der Interaktion zwischen Reverser Transkriptase (P-Protein) und RNA-Verpackungssignal aviärer Hepatitis-B-Viren

禽乙型肝炎病毒逆转录酶（P蛋白）与RNA包装信号相互作用的生化表征

• 批准号: 5285394
• 负责人: Professor Dr. Michael Nassal
• 金额: --
• 依托单位: Klinik für Innere Medizin II - Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie und Infektiologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1996-12-31 至 2010-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5285394?language=en
• 关键词: Biochemische; Charakterisierung; der; Interaktion; zwischen

Hepatitis B Viren replizieren über reverse Transkription eines RNA-Intermediates, der prägenomischen RNA. Anders als bei Retroviren initiiert die Reverse Transkriptase (RT), P-Protein, die Replikation nicht mittels eines Nukleinsäure-Primers, sondern de novo innerhalb des strukturierten e-RNA Elements. Die Aufklärung dieses ungewöhnlichen Mechanismus ist das langfristige Ziel des Projektes. Neben P-Protein und e enthält der Initiationskomplex Chaperone als essentielle Komponenten und kann nur mit in vitro translatiertem P-Protein des Enten-HepatitisB-Virus (DHBV) rekonstruiert werden. Eine biophysikalische Strukturaufklärung ist daher z.Zt. nicht möglich. Unser stattdessen biochemisch orientierter Ansatz hat gezeigt, daß die Komplexbildung eine drastische RNA-Strukturänderung induziert und für die Interaktion mit dem Protein wichtige Struktur-, Basen- und Rückgrat-abhängige RNA-Teilelemente definiert. Drei komplementäre Ansätze sollen nun verstärkt die Rolle des P-Proteins charakterisieren: die Kartierung der Interaktionsregionen zwischen RNA und P-Protein durch Photo-Crosslinking, die Identifizierung weiterer essentieller RNA-Determinanten durch in vitro Selektion und die experimentelle Prüfung der Ähnlichkeit des P-Proteins mit strukturbekannten Retrovirus RTs durch funktionelle Analyse gezielt mutierter P-Proteine.

B型肝炎病毒复制是一种逆转录RNA中间体，即前基因组RNA。在逆转录病毒中，逆转录病毒起始于逆转录转录酶（RT）、P蛋白，但不使用核酸引物，而是重新构建了e-RNA元件。Die Aufklärung dieses ungewöhnlichen Mechanismus ist das langfristige Ziel des Projektes.乙型肝炎病毒（DHBV）P蛋白的体外表达可作为复合分子伴侣的重要组成部分，但需要韦尔登病毒P蛋白的体外表达。Eine biophysikalische Strukturaufklärung ist daher z.Zt.不是我。根据生物化学的统计，确定了一种复杂的RNA-Strukturänderung induziert和für die Interaktion with dem Protein wichtige Struktur-，Basen-和Rückgrat-abhängige RNA-Teilelemente definiert。三个完整的答案是研究P-蛋白质特征的作用：通过光交联来区分区域间RNA和P-蛋白质，通过体外选择和实验来鉴定其他必需的RNA决定因素，通过功能分析来构建逆转录病毒RT，从而确定P-蛋白质的作用。