课题基金 / 基金详情

標識遺伝子導入によるin vivo相互作用解析法の開発

標識遺伝子導入によるin vivo相互作用解析法の開発
使用标记基因导入的体内相互作用分析方法的开发
批准号：
10878120
负责人：
高橋 直樹
金额：
$1.34万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1998 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878120/
关键词：
標的遺伝子エピトープタグHisタグホメオボックスゲノム情報遺伝子導入動物転写調節線虫

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
本研究の目的は、我々がこれまで行ってきた抗体を用いた標的遺伝子単離法を、より効率の良い単離法にするため、転写因子にタグを付けた遺伝子を導入したトランスジェニック線虫を作製し、そのタグを利用した標的配列の濃縮を行うことである。2種類のホメオボックス遺伝子Hox(mab5,egl5),unc4にFLAGエピトープタグおよびHis6タグを結合したコンストラクトを作製し、これらの遺伝子が染色体に組み込まれたトランスジエニック個体を得た。導入遺伝子がミュータントフェノタイプをレスキューすることから、これらの遺伝子産物は正常遺伝子産物と同じ標的遺伝子群の発現制御をしていると考えられる。His6タグは他の抗体による精製と異なり、Niカラムを用いて、蛋白が変性状態で精製することが可能であることから、この方法においても有用なタグであると考えられる。また、His6タグは大腸菌、酵母、培養細胞などからの蛋白の精製に広く用いられているが、多細胞生物個体中でタグ付き蛋白が正常な機能を果たすことを示したのは、本研究が初めてであると思われる。抗体やタグを利用してアフィニテイー精製したDNAプール中に濃縮された標的配列をDNAチップを使ったハイブリダイゼーションによって特定できるかどうかの検討を行った。モデル実験として全ゲノムに特定の配列を加えたDNAをプローブとしたハイブリダイゼーションによって、10倍以下の濃縮で特定配列の特定ができることが明らかになった。またチップ作製のための短い(約100bp)ゲノム断片を含んだライブラリーを作製した。DNAシークエンサーを用いたゲノムスキャンニングによる濃縮配列検出の検討も現在行っている。
英文摘要
本研究の目的は、我々がこれまで行ってきた抗体を用いた標的遺伝子単離法を、より効率の良い単離法にするため、転写因子にタグを付けた遺伝子を導入したトランスジェニック線虫を作製し、そのタグを利用した標的配列の濃縮を行うことである。2種類のホメオボックス遺伝子Hox(mab5,egl5),unc4にFLAGエピトープタグおよびHis6タグを結合したコンストラクトを作製し、これらの遺伝子が染色体に組み込まれたトランスジエニック個体を得た。導入遺伝子がミュータントフェノタイプをレスキューすることから、これらの遺伝子産物は正常遺伝子産物と同じ標的遺伝子群の発現制御をしていると考えられる。His6タグは他の抗体による精製と異なり、Niカラムを用いて、蛋白が変性状態で精製することが可能であることから、この方法においても有用なタグであると考えられる。また、His6タグは大腸菌、酵母、培養細胞などからの蛋白の精製に広く用いられているが、多細胞生物個体中でタグ付き蛋白が正常な機能を果たすことを示したのは、本研究が初めてであると思われる。抗体やタグを利用してアフィニテイー精製したDNAプール中に濃縮された標的配列をDNAチップを使ったハイブリダイゼーションによって特定できるかどうかの検討を行った。モデル実験として全ゲノムに特定の配列を加えたDNAをプローブとしたハイブリダイゼーションによって、10倍以下の濃縮で特定配列の特定ができることが明らかになった。またチップ作製のための短い(約100bp)ゲノム断片を含んだライブラリーを作製した。DNAシークエンサーを用いたゲノムスキャンニングによる濃縮配列検出の検討も現在行っている。
期刊论文(3)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
K.Ohsaki et al: "Expression of the Vax homeobox genes suggests multiple roles in eye development" Genes to Cells. (in press). (1999)
K.Ohsaki 等人：“Vax 同源框基因的表达表明在眼睛发育中发挥多种作用”《基因到细胞》。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
K.Takeuchi et al: "mmab is the candidate for Hox-C4 gene target" Neuroscience Research. Suppl.22. S227 (1998)
K.Takeuchi 等人：“mmab 是 Hox-C4 基因靶标的候选者”神经科学研究。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
H.Ohuchi et al: "Correlation of wing-leg identity in ectopic FGF-induced chimeric limbs with the differential expression of chielc Tbx 5 and Tbx 4" Development. 125. 51-60 (1998)
H.Ohuchi 等人：“异位 FGF 诱导的嵌合肢中翼腿同一性与 chielc Tbx 5 和 Tbx 4 差异表达的相关性”开发。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
データ伝送エネルギーコスト低減を目指す高効率Si基板上半導体薄膜レーザ実現
  • 批准号：
    23KJ0935
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.15万
  • 财政年份：
    2023
  • 负责人：
    高橋 直樹
  • 依托单位：
    Tokyo Institute of Technology
食品に含まれる催奇性の新しい検出法の開発
  • 批准号：
    19658051
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.24万
  • 财政年份：
    2007
  • 负责人：
    高橋 直樹
  • 依托单位：
    The University of Tokyo
Mab21遺伝子の性行動制御機構の解明
  • 批准号：
    19040005
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $4.16万
  • 财政年份：
    2007
  • 负责人：
    高橋 直樹
  • 依托单位：
    The University of Tokyo
2光子励起顕微鏡によるinvivo観察のための固定具の開発
  • 批准号：
    18920006
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
  • 资助金额：
    $0.42万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    高橋 直樹
  • 依托单位：
    生理学研究所 技術課
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