標識遺伝子導入によるin vivo相互作用解析法の開発

使用标记基因导入的体内相互作用分析方法的开发

• 批准号: 10878120
• 负责人: 高橋 直樹
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878120/
• 关键词: 標的遺伝子; エピトープタグ; Hisタグ; ホメオボックス; ゲノム情報; 遺伝子導入動物; 転写調節; 線虫

本研究の目的は、我々がこれまで行ってきた抗体を用いた標的遺伝子単離法を、より効率の良い単離法にするため、転写因子にタグを付けた遺伝子を導入したトランスジェニック線虫を作製し、そのタグを利用した標的配列の濃縮を行うことである。2種類のホメオボックス遺伝子Hox(mab5,egl5),unc4にFLAGエピトープタグおよびHis6タグを結合したコンストラクトを作製し、これらの遺伝子が染色体に組み込まれたトランスジエニック個体を得た。導入遺伝子がミュータントフェノタイプをレスキューすることから、これらの遺伝子産物は正常遺伝子産物と同じ標的遺伝子群の発現制御をしていると考えられる。His6タグは他の抗体による精製と異なり、Niカラムを用いて、蛋白が変性状態で精製することが可能であることから、この方法においても有用なタグであると考えられる。また、His6タグは大腸菌、酵母、培養細胞などからの蛋白の精製に広く用いられているが、多細胞生物個体中でタグ付き蛋白が正常な機能を果たすことを示したのは、本研究が初めてであると思われる。抗体やタグを利用してアフィニテイー精製したDNAプール中に濃縮された標的配列をDNAチップを使ったハイブリダイゼーションによって特定できるかどうかの検討を行った。モデル実験として全ゲノムに特定の配列を加えたDNAをプローブとしたハイブリダイゼーションによって、10倍以下の濃縮で特定配列の特定ができることが明らかになった。またチップ作製のための短い(約100bp)ゲノム断片を含んだライブラリーを作製した。DNAシークエンサーを用いたゲノムスキャンニングによる濃縮配列検出の検討も現在行っている。

は の purpose, this study I 々 が こ れ ま で line っ て き を た antibody with い た mark heritage 伝 son 単 from を, よ り good working rate の い 単 from method に す る た め, planning to write factor に タ グ を pay け た posthumous son 伝 を import し た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク し the nematodes を cropping, そ の タ グ を using し た mark line with column の enrichment を う こ と で あ る. 2 kinds の ホ メ オ ボ ッ ク ス posthumous son 伝 Hox (mab5, egl5), unc4 に FLAG エ ピ ト ー プ タ グ お よ び His6 タ グ を combining し た コ ン ス ト ラ ク ト を as し, こ れ ら の posthumous son 伝 が chromosome に group み 込 ま れ た ト ラ ン ス ジ エ ニ ッ ク individual を た. Import legacy 伝 son が ミ ュ ー タ ン ト フ ェ ノ タ イ プ を レ ス キ ュ ー す る こ と か ら, こ れ ら の heritage 伝 zi chan content of the latter's は normal but 伝 content と heritage with じ mark 伝 subgroup の 発 now suppression を し て い る と exam え ら れ る. His6 タ グ は の antibody に he よ る refined と different な り, Ni カ ラ ム を with い て, protein が - state で refined す る こ と が may で あ る こ と か ら, こ の way に お い て も useful な タ グ で あ る と exam え ら れ る. ま た, His6 タ グ は coliform bacteria, yeast and cultured cells な ど か ら の protein の refined に hiroo く with い ら れ て い る が, multicellular organisms individuals で タ グ pay き normal が な proteins function を fruit た す こ と を shown し た の は, at the beginning of this study が め て で あ る と think わ れ る. Antibody や タ グ を using し て ア フ ィ ニ テ イ ー refined し た DNA プ ー ル に enrichment in さ れ た mark with column を DNA チ ッ プ を make っ た ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ っ て specific で き る か ど う か の 検 line for を っ た. モ デ ル be 験 と し て full ゲ ノ ム に specific の match column を plus え た DNA を プ ロ ー ブ と し た ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ っ て の enrichment, 10 times the で specific match column の が で き る こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0 is used to fabricate ため を short またチップ (about 100bp)ゲノム fragments を containing んだラ ブラリ ブラリ を is used to fabricate た. DNA シ ー ク エ ン サ ー を with い た ゲ ノ ム ス キ ャ ン ニ ン グ に よ る enrichment with column 検 out の beg も 検 line now っ て い る.

项目成果

K.Ohsaki et al: "Expression of the Vax homeobox genes suggests multiple roles in eye development" Genes to Cells. (in press). (1999)

K.Ohsaki 等人：“Vax 同源框基因的表达表明在眼睛发育中发挥多种作用”《基因到细胞》。

K.Takeuchi et al: "mmab is the candidate for Hox-C4 gene target" Neuroscience Research. Suppl.22. S227 (1998)

K.Takeuchi 等人：“mmab 是 Hox-C4 基因靶标的候选者”神经科学研究。

H.Ohuchi et al: "Correlation of wing-leg identity in ectopic FGF-induced chimeric limbs with the differential expression of chielc Tbx 5 and Tbx 4" Development. 125. 51-60 (1998)

H.Ohuchi 等人：“异位 FGF 诱导的嵌合肢中翼腿同一性与 chielc Tbx 5 和 Tbx 4 差异表达的相关性”开发。