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転写とDNA修復のカップリングの分子機構の研究

転写とDNA修復のカップリングの分子機構の研究
转录与DNA修复耦合的分子机制研究
批准号：
09269214
负责人：
大熊 芳明
金额：
$1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1997 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09269214/
关键词：
転写基本転写因子TFIIHDNA除去修復XPCXPGプロモーター

项目摘要

项目成果

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1.転写及びDNA除去修復反応に必須な因子TFIIHの大量精製転写再構成系を構築する目的で、昨年度確立したヒトHeLa細胞の大量培養システムを用い、高密度でのHeLa細胞培養を200リットルの培養規模で行った。この培養細胞からDignamらの方法を用いて調製した核抽出液は、大熊が米国のRoeder研で用いたものと同程度の転写活性を示した。この抽出液を材料に、基本転写因子TFIIHの精製を行なった。3つのサブユニットに対する抗体でその挙動を追いながら、4つのカラムを用いて精製した約50μgのTFIIHには、転写再構成反応において十分な活性が検出された。現在、このTFIIHを用い、9個のサブユニットの一部を欠いたサブタイプや一つのサブユニットに変異が入ることである機能を失った変異TFIIHの活性との比較を行うことで、転写におけるTFIIHの機能、役割を解析している。2.無細胞DNA除去修復系の確立と修復機構解析DNA修復関連因子(XPC/HHR23B、XPF/ERCCI、XPG等)を新たにバキュロウイルスにより発現し、高度に精製した。これらは、色素性乾皮症XP群の患者からのXP-C、XP-F、XP-G等の細胞抽出液のDNA除去修復欠損を回復させることを確認した。そこで現在、我々はこれらを他の精製XP群蛋白質と合わせ、無細胞修復系を再構成する試みをしている。また転写の鋳型となる遺伝子DNAのプロモーターの転写開始点から下流の領域にピリミジン・ダイマーや6-4紫外線照射産物等のDNA傷害部位を作製し、転写とカップルしたDNA除去修復機構を解析しようとしている。現段階では、TFIIHと他の修復因子との相互作用を解析する一環で、XPCとXPGがTFIIHと結合することを見出している。
期刊论文(4)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Ohkuma,Y.: "Multiple functions of general transcription factors TFIIE and TFIIH in transcription:Possible points of regulation by trans-acting factors." J.Biochem.122. 481-489 (1997)
Ohkuma,Y.：“一般转录因子 TFIIE 和 TFIIH 在转录中的多种功能：反式作用因子的可能调节点。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Sugasawa,K.et al.: "Two human homologs of Rad23 are functionally interchangeable in complex formation and stimulation of XPC repair activity." Mol.Cell.Biol.17. 6924-6931 (1997)
Sugasawa, K. 等人：“Rad23 的两种人类同源物在复合物形成和刺激 XPC 修复活性方面可以功能互换。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Kojima,S, et al.: "Transcriptional activation domain of human BTEB 2,a GC box-binding factor." J.Biochem.121. 389-396 (1997)
Kojima,S 等人：“人 BTEB 2 的转录激活域，一种 GC 盒结合因子。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Masutani,C.et al.: "Identification and characterization of XPC-binding domain of hHR23B" Mol.Cell.Biol.17. 6915-6923 (1997)
Masutani,C.et al.：“hHR23B XPC 结合域的鉴定和表征”Mol.Cell.Biol.17。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
転写因子の欠損に起因する発がんにおける基本転写因子の役割と核内シグナル伝達機構
  • 批准号：
    15024240
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $4.1万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    大熊 芳明
  • 依托单位：
    Osaka University
複数のサイクリン依存性キナーゼ複合体によるRNAポリメラーゼIIの転写制御の解析
  • 批准号：
    14033226
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.07万
  • 财政年份：
    2002
  • 负责人：
    大熊 芳明
  • 依托单位：
    Osaka University
転写因子の欠損に起因する発がんにおける基本転写因子の役割と核内シグナル伝達機構
  • 批准号：
    14028035
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $4.22万
  • 财政年份：
    2002
  • 负责人：
    大熊 芳明
  • 依托单位：
    Osaka University
真核生物ゲノムの遺伝子情報発現における基本転写因子の制御的役割の解明
  • 批准号：
    13206040
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
  • 资助金额：
    $4.61万
  • 财政年份：
    2001
  • 负责人：
    大熊 芳明
  • 依托单位：
    Osaka University
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