第2の麻疹ウィルスレセプター -蛋白化学的同定とcDNAクローニング-

第二麻疹病毒受体-蛋白质化学鉴定及cDNA克隆-

• 批准号: 11877056
• 负责人: 瀬谷 司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Cancer and Cardiovascular Disaeses
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877056/
• 关键词: 麻疹ウィルスレセプター; CD46; マーモセット; B Cell; cDNAクローニング; 単クローン抗体; 合胞体形成阻害; ウェスタンブロッティング

1.B95aマーモセットB cell上のヒトCD46 homologueの同定マーモセットB95a細胞株から2種のCD46様分子をcDNAクローニングした。1つは4つのshort consensus repeat(SCR)、1つは3つのSCRを含む細胞外ドメインを持つ。N末1個のSCR(SCR1)の有無からmRNAのalternative splicingにより2種のspliced formが生じることが判明した。SCR1^+isoformが90%、SCR1^-isoformが10%の比で膜上に存在し、SCR1^+isoformのみが麻疹ウィルスワクチン株CAMのレセプターとして機能した。他のウィルス株はwild-typeを含めてマーモセットCD46をレセプターとして使用しなかった。B95aの麻疹ウィルス高感受性はCD46以外のレセプター分子に起因する。2.B95a上の麻疹ウィルスセカンドレセプターの同定B95aをマウス(Bal b/c)にくり返し腹腔(i.p)又は皮内(s.c)投与し、脾細胞からhybridomaを樹立した。Nagahata株、最近のwild-type strain(Yokoyama株)の合胞体形成阻害活性をクライテリアにセカンドレセプターの阻害抗体をスクリーニングした。6回Fusionを試行し、計3,500個以上のhybridomaをスクリーニングしたが完全阻害抗体は得られなかった。部分阻害抗体は4株得られ、うち2種は分子量約2万の同一分子を認識した。他の2種はwestern blotで分子同定ができなかった。当該分子の同定を推進中である。

1. B95a マ ー モ セ ッ ト on B cell の ヒ ト CD46 'の with fixed マ ー モ セ ッ ト B95a cell lines か ら two の CD46 others in molecular を cDNA ク ロ ー ニ ン グ し た. 1 つ は 4 つ の short consensus repeat (SCR), 1 つ は 3 つ の SCR を containing む extracellular ド メ イ ン を つ. Whether the last <s:1> SCR(SCR1) <s:1> has <s:1> らmRNA <s:1> alternative splicingによ two <s:1> spliced forms が じる <s:1> とが とが determine た. SCR1 ^ + isoform が 90%, SCR1 ^ - isoform が 10% の で membrane に し, SCR1 ^ + isoform の み が measles ウ ィ ル ス ワ ク チ ン strains CAM の レ セ プ タ ー と し て function し た. He の ウ ィ ル ス strains は wild - type contains を め て マ ー モ セ ッ ト CD46 を レ セ プ タ ー と し て use し な か っ た. B95a <s:1> measles ウィ に ス ス hypersensitivity ス molecules other than CD46 レセプタ レセプタ に cause する. 2. の measles on B95a ウ ィ ル ス セ カ ン ド レ セ プ タ ー の with fixed B95a を マ ウ ス (Bal b/c) に く り return し (i.p) and abdominal cavity は intradermal (s.c) cast with し, spleen cell か ら hybridoma を set し た. Nagahata strains, recently の wild - type strain (Yokoyama strains) の syncytial form resistance against active を ク ラ イ テ リ ア に セ カ ン ド レ セ プ タ ー の resistance against antibody を ス ク リ ー ニ ン グ し た. 6 back to Fusion を trial し, more than 3500 の hybridoma を ス ク リ ー ニ ン グ し た が entirely hindered harm antibody は ら れ な か っ た. Four partial anti-harm antibodies were obtained, resulting in two types: られ and うち, with a molecular weight of approximately 20,000 <s:1>. The same molecule is を recognized at た た. He <s:1> two <s:1> western blotで molecules agreed がで な な った った. When the molecule を is advancing である.

项目成果

Doi, Y., T. Seya et. al.: "Moesin is not a receptor receptor for measles virus entry into mouse embryonic stem cells"J. Virol.. 72. 1586-1592 (1998)

Doi，Y.，T. Seya 等。

Seya, T., et al.: "CD46 (membrane cofactor protein (MCP) of complement, measles virus receptor) : structural and functional divergence among species"Int. J. Mol. Med.. 7 (1998)

Seya，T.，等人：“CD46（补体膜辅因子蛋白（MCP），麻疹病毒受体）：物种之间的结构和功能差异”Int。

Shida, K., T. Seya et. al.: "The 3-UT of the ubiquitous message of human CD46 confers selective suppression of protein production in murine cells"Eur. J. Immunol.. 29. 3603-3608 (1999)

Shida，K.，T. Seya 等。

Kurita-Taniguchi, M. T. Seya et. al.: "Activation of human macrophages through CD46 (measles virus receptor) : Production of IL-12 p40 and nitric oxygen in association with recruitment *p-1 to CD46"J. Immunol.. (in press).

Kurita-Taniguchi，M. T. Seya 等。

Marakami, Y., T. Seya et al.: "Molecular cloning of membrane cofactor protein (MCP. CD46) on B95a cell an Epstein-Barr virus-trans formed marmoset B cell *"Biochem. J.. 330. 1351-1359 (1998)

Marakami, Y., T. Seya 等人：“在 B95a 细胞和 Epstein-Barr 病毒转化的狨猴 B 细胞上进行膜辅因子蛋白 (MCP.CD46) 的分子克隆*”Biochem。