RNAポリメラーゼII転写伸長因子が支配する遺伝子群の動的解析

RNA聚合酶II转录延伸因子控制基因的动态分析

• 批准号: 12028201
• 负责人: 畠山 昌則
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028201/
• 关键词: 転写伸長因子; ELL; elonginA; elonginA2; p53; テトラサイクリン制御性プロモーター; テクトースオペロン; 外来遺伝子発現誘導系

ELLやElonginに代表される転写伸長因子はRNAポリメラーゼIIの一時休止や停止を抑え、mRNA転写速度を促進する一群の蛋白分子である。本研究はELLを中心に用い、細胞内における転写伸長因子の機能的役割を明らかにすることを目的とした。まず、哺乳動物細胞において厳密な外来遺伝子の発現誘導を可能にするTcIP promoterを用い、ELL cDNAをサイトカイン依存性の造血系細胞であるBaF3細胞株に安定的に導入した。得られた安定変異細胞株においてELLを誘導的に発現させた結果、同分子は細胞増殖を抑制することが明らかとなった。同様の結果は、ELL相同分子であるELL2を用いても再現された。また、ELLと類似の転写伸長活性を有するElongin Aのアミノ酸配列情報をもとに新規ヒト分子Elongin A2をコードするcDNAを単離した。Elongin A mRNAは広い細胞種・細胞系列において構成的に発現されるのに対し、Elongin A2のmRNA発現は精巣特異的であった。さらに、組み換えElongin A2を用い、試験管内転写伸長アッセイを行った結果、同分子はRNA polymerase IIの転写伸長促進活性を有することが明らかとなった。Elongin Aの場合、その転写伸長活性は調節分子と考えられているElongin B/Cとの結合により増強されるのに対し、Elongin A2の転写伸長活性はElongin B/Cにより全く影響を受けなかった。今回樹立に成功したELL誘導発現細胞を用い、DNA chip解析を通してELL誘導前後のmRNA間において発現レベルが有意に変動する遺伝子群を同定し、細胞増殖制御とELL標的遺伝子群の関連を追求していく予定である。また、Elongin A2の組織特異的な役割ならびにその機能制御機構を検討していく予定である。

ELL Elongin means to write the elongation factor, stop the suppression, stop the II, and mRNA the speed of writing promotes the activation of a group of protein molecules. In this study, ELL centers were used to write about the mechanism of elongation factors in the center of the study. The cells of mammals and mammals are sensitive to foreign agents. It is possible that TcIP promoter is used, ELL cDNA is dependent, hematopoietic cells are stable and stable. The results were obtained from the cell lines of diazepam and diazepam, which were guided by ELL, and the same molecular weight was used to inhibit the colonization of cells. The same result as that of ELL, the same molecule is used to detect the same ELL2. The elongation activity is similar to that of Elongin An and ELL. The molecular Elongin A2 is responsible for cDNA isolation. The series of Elongin A mRNA cell species has been successfully generated, and the Elongin A2 cell mRNA has been shown to have high-performance performance. The results of the experiment, the Elongin A2 system, the test tube, and the activity of the same molecular RNA polymerase II to promote the growth of the device are sensitive to each other. The combination of Elongin An and Elongin A, the molecular weight analysis of elongation activity, the combination of Elongin An and Elongin A 2, the elongation activity of Elongin B binder, and the whole effect of elongation activity, the whole effect of elongation activity. This time, we have successfully implemented ELL and DNA chip analysis. After the mRNA ELL, we have found that you intend to change the target subgroup of ELL, and that the subgroup of cellular colonization and control of cell growth is in pursuit of a predetermined target. The service cutting equipment of the Elongin A2 organization is capable of controlling the operation of the organization to determine the performance of the equipment.

项目成果

Hatakeyama.M: "Identification and Characterization of Elongin A2, a new member of the elongin family of transcription elongation factors, specifically expressed in the testis."The journal of biological chemistry. 275. 6546-6552 (2000)

Hatakeyama.M：“Elongin A2 的鉴定和表征，Elongin A2 是转录延伸因子 elongin 家族的新成员，在睾丸中特异性表达。”生物化学杂志。

Hatakeyama.M: "β 3-endonexin as a novel inhibitor of cyclin A-asssociated kinase."Biochemical and biophysical research communications. 267. 947-952 (2000)

Hatakeyama.M：“β 3-内毒素作为细胞周期蛋白 A 相关激酶的新型抑制剂。”生物化学和生物物理研究通讯。 267. 947-952 (2000)

Hatakeyama.M: "Collective Inhibition of pRB Family Proteins by Phosphorylation in Cells with p16^<INK4a> Loss or Cyclin E 0verexpression."The journal of biological chemistry. (in press). (2001)

Hatakeyama.M：“p16^<INK4a> 丢失或细胞周期蛋白 E 0 过度表达的细胞中磷酸化对 pRB 家族蛋白的集体抑制。”生物化学杂志。

Hatakeyama.M: "Human p55CDC/Cdc20 associates with cyclin A and is phosphorylated by cyclin A-Cdk2 complex."Biochemical and biophysical research communications. 268. 530-534 (2000)

Hatakeyama.M：“人类 p55CDC/Cdc20 与细胞周期蛋白 A 结合，并被细胞周期蛋白 A-Cdk2 复合物磷酸化。”生物化学和生物物理研究通讯。

Hatakeyama.M: "Ras and STAT are essential and sufficient downstream components of JAKs in cell proliferation"Japanese Journal of Cancer Research. 93. 527-533 (2000)

Hatakeyama.M：“Ras 和 STAT 是 JAK 在细胞增殖中必需且充分的下游成分”，《日本癌症研究杂志》。