ヒト塩基除去修復酵素の遺伝子多型に基づく活性の個体差に関する研究

基于人类碱基切除修复酶基因多态性的个体活性差异研究

• 批准号: 12213154
• 负责人: 新村 和也
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213154/
• 关键词: 8-ヒドロキシグアニン; 塩基除去修復; 遺伝子多型; OGG1遺伝子; MYH遺伝子; SNP; DNAグリコシラーゼ; 突然変異

DNA中に生じた損傷塩基は突然変異の原因となる場合が多いため、その修復機構である塩基除去修復系の酵素遺伝子の一塩基多型(SNP)に基づく修復活性の差異は、各個人における遺伝子異常の起こりやすさを遺伝的に規定することになる。そこで、本研究は、塩基除去修復系遺伝子のSNPに基づく多型蛋白質の修復活性の差異を同定していくことを目的とする。本年度は、損傷塩基の一つである8-ヒドロキシグアニン(oh^8G)の修復に関わるヒトMYH,APEX遺伝子に注目し、11種類のSNPを同定し、その頻度を明らかにした。これらの多型のうち、7種類はアミノ酸の置換を伴うものであった。また、このうち、MYH遺伝子のQ324H多型の修復活性を(1)組替え蛋白質のアデニン除去能、(2)大腸菌での突然変異率制御能、の点で比較した。多型蛋白質間では有意な修復活性の差は見られなかったが、MYH-1型(ミトコンドリア型)は、MYH-2型(核型)に比ベ、活性が低いことを明らかにした。また、この検討を通して、MYH蛋白質は、生理的条件下では、DNA中のA:oh^8G塩基対を特異的に認識し、アデニンを除去修復する酵素であることを明らかにした。もう一つのoh^8G修復に関わる酵素遺伝子であるOGG1については、RT-PCR法および新規に作製した2種類の抗ヒトOGG1抗体を用いたウェスタンブロット法にて、そのアイソフォームを解析した。その結果、肺扁平上皮がんとの関連性が示唆されるSer326Cys多型の存在するOGG1-1a型が、ヒト細胞内での主要なアイソフォームであることを明らかにした。また、このOGG1-1a型蛋白質の活性調節機構をin vitroのニッキング法にて検討し、APEX蛋白質存在下では、OGG1蛋白質のAPリアーゼ活性が上昇することを示した。

に in DNA じ た salt base は suddenly - different の injuries と な が る occasion more い た め, そ の repair agency で あ る salt base to remove traces of repair is の enzyme 伝 son の a salt Quito type (SNP) に づ く repair active は の differences, each person に お け る heritage 伝 child abnormal の up こ り や す さ を but 伝 に rules す る こ と に な る. そ こ で, this study は, salt to remove traces of repair department 伝 son の SNP に base づ く protein の repair with more active を の differences with fixed し て い く こ と を purpose と す る. Salt base の は, damage the year つ で あ る 8 - ヒ ド ロ キ シ グ ア ニ ン (oh ^ 8 g) の repair に masato わ る ヒ ト MYH, APEX heritage 伝 に attention し, 11 species の SNP を with し, そ の frequency を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder6 れら <s:1> polymorphic <s:1> うち, 7-kind ア ア ノ ノ acid <s:1> displacement を accompanied by う うち であった であった であった. ま た, こ の う ち, MYH but 伝 の Q324H の repair with more active を (group 1) for え protein の ア デ ニ ン can remove, (2) the coliform で の suppression can suddenly - different rate, の point で compare し た. Polymorphism between protein で は intentionally な repair activity の poor は see ら れ な か っ た が, MYH - type 1 (ミ ト コ ン ド リ ア type) は, MYH - type 2 (karyotype) に is lower than ベ, active が い こ と を Ming ら か に し た. Beg を ま た, こ の 検 tong し て, MYH protein は, physiological conditions で は, DNA in の A: oh ^ 8 g salt を specific に know し seaborne, ア デ ニ ン を remove repair す る enzyme で あ る こ と を Ming ら か に し た. も う a つ の oh ^ 8 g repair に masato わ る enzyme heritage 伝 son で あ る OGG1 に つ い て は, rt-pcr method お よ び new rules に cropping し た 2 kinds の resistance ヒ ト を OGG1 antibody with い た ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に て, そ の ア イ ソ フ ォ ー ム を parsing し た. そ の results, pulmonary squamous epithelium が ん と の masato even sex が in stopping さ れ る Ser326Cys polymorphism の is す る OGG1-1 type a が, ヒ ト intracellular で の main な ア イ ソ フ ォ ー ム で あ る こ と を Ming ら か に し た. ま た, こ の OGG1-1 type a protein の activity regulating mechanism を in vitro の ニ ッ キ ン グ method に て beg し 検, APEX protein in the presence of で は, OGG1 protein の AP リ ア ー ゼ active が rise す る こ と を shown し た.

项目成果

Shinmura,K.,Yamaguchi,S., et al: "Somatic mutations and single nucleotide polymorphisms of base excision repair genes involved in the repair of 8-hydroxyguanine in damaged DNA"Cancer Lett.. (in press).

Shinmura,K.、Yamaguchi,S. 等人：“参与修复受损 DNA 中 8-羟基鸟嘌呤的碱基切除修复基因的体细胞突变和单核苷酸多态性”Cancer Lett..（出版中）。

Kimura,K.,Shinmura,K., et al.: "Absence of germline CHK2 mutations in familial gastric cancer"Jpn.J.Cancer Res.. 91. 875-879 (2000)

Kimura,K.、Shinmura,K.等人：“家族性胃癌中不存在种系 CHK2 突变”Jpn.J.Cancer Res.. 91. 875-879 (2000)

Shinmura,K.and Yokota,J.: "The OGG1 gene encodes a repair enzyme for oxidatively damaged DNA and is involved in human carcinogenesis"Antiox.Redox Signal.. (in press).

Shinmura,K. 和 Yokota,J.：“OGG1 基因编码氧化损伤 DNA 的修复酶，并参与人类致癌作用”Antiox.Redox Signal..（出版中）。

Shinmura,K.,Yamaguchi,S., et al: "Adenine excisional repair function of MYH protein on the adenine : 8-hydroxyguanine base pair in double-stranded DNA"Nucleic Acids Res.. 28. 4912-4918 (2000)

Shinmura，K.，Yamaguchi，S.，等人：“MYH 蛋白在腺嘌呤上的腺嘌呤切除修复功能：双链 DNA 中的 8-羟基鸟嘌呤碱基对”Nucleic Acids Res.. 28. 4912-4918 (2000)

Saitoh,T.,Shinmura,K., et al.: "Enhancement of OGG1 protein AP lyase activity by increase of APEX protein"Mutat.Res.. (in press).

Saitoh,T.,Shinmura,K.等人：“通过增加 APEX 蛋白来增强 OGG1 蛋白 AP 裂解酶活性”Mutat.Res..（出版中）。