ヒト塩基除去修復酵素の遺伝子多型に基づく活性の個体差に関する研究

基于人类碱基切除修复酶基因多态性的个体活性差异研究

• 批准号: 13770075
• 负责人: 新村 和也
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770075/
• 关键词: 8-ヒドロキシグアニン; 塩基除去修復; 遺伝子多型; OGG1遺伝子; MYH遺伝子; 前進突然変異; 突然変異率; B[a]PDE; OGGI遺伝子; SNP; 突然変異; 翻訳効率

DNA中に生じた損傷塩基は突然変異の原因となる場合が多いため、その修復機構である塩基除去修復系の酵素遺伝子の一塩基多型(SNP)に基づく修復活性の差異は、各個人における遺伝子異常の起こりやすさを遺伝的に規定することになる。そこで、本研究は、塩基除去修復系遺伝子のSNPに基づく多型蛋白質の修復活性の差異を同定していくことを目的とする。これまでに、この系に属するOGG1,MYH, APEX遺伝子のSNPを同定し、その活性を、組み換え蛋白質あるいは大腸薗の系で比較してきた。そこで、本年度は、ヒト細胞内におけるこれらの多型蛋白質の活性を比較検討するため、まず、野性型蛋白質の突然変異抑制能を検討した。肺がん細胞株H1299のOGG1,MYH, APEX高発現株を樹立し、シャトルプラスミドpMY189に対する変異抑制能をsupF前進突然変異分析により検討した。pMY189のsupF遺伝子内に一ケ所損傷塩基である8-ヒドロキシグアニン(oh^8G):C塩基対を導入したpMY189-oh^8Gあるいは、pMY189をin vitroでベンゾ[a]ピレン代謝産物B[a]PDEと反応させて得たpMY189-B[a]PDEを、H1299に導入、複製後に回収し、大腸菌KS40/pKY241に導入することにより、ヒト細胞内でのsupF遺伝子変異頻度を調べた。すると、oh^8Gを含まないpMY189の場合と比べそれぞれ65倍、34倍の上昇を認めた。また、いずれの場合もG:C->T:A変異が優位に認められた。pMY189-oh^8Gの場合の、変異率および、oh^8G:C箇所におけるG:C->T:A変異率は、OGG1およびMYH高発現株で有意に減少したが、APEX高発現株では有意な差は認められなかった。一方、pMY189-B[a]PDEの場合は、いずれの高発現株でも親株と比べ有意な差は認められなかった。以上より、OGG1,MYH蛋白質は、ヒト細胞内においてoh^8GによるG:C->T:A突然変異のサプレッサーとして働くことが示唆された。この系を利用して現在、多型蛋白質間での活性の差を検討中である。

DNA中产生的受损碱通常会引起突变，因此基于基础切除修复系统中酶基因的单核苷酸多态性（SNP）的修复活性差异，这是修复机制，从遗传上定义了每个个体遗传异常的可能性。因此，本研究旨在根据基础切除修复基因中的SNP确定多态蛋白质修复活性的差异。到目前为止，已经确定了属于该系统的OGG1，MYH和最高基因的SNP，并使用重组蛋白或结肠系统比较了它们的活性。因此，今年为了比较这些多态性蛋白在人类细胞中的活性，我们首先检查了野生型蛋白抑制突变的能力。我们建立了肺癌细胞系H1299的高表达OGG1，MYH和顶点的菌株，并通过SUPF正向突变分析研究了突变抑制作用的穿梭质粒PMY189的能力。 PMY189-OH^8G，它是8-羟基鸟嘌呤（OH^8G）的受损基础：C碱基对，或PMY189-B [A] PDE通过与benzo [a] pyrene代谢物B [a] pde Reption pmy189获得的PMY189获得，然后在体内引入了H1299，并将其引入H1299中，并引入H1299，并恢复为H1299，并恢复到H1299中。 KS40/PKY241，检查人类细胞突变的频率。与PMY189相比，这表明增加了65倍，增加了34倍，而PMY189不含OH^8G。此外，在所有情况下，g：c-> t：突变是主要的。 OGG1和MYH高表达菌株的突变率和G：C-> T：在OH^8G位置处的突变速率显着降低，但在Apex高表达菌株中未观察到显着差异。另一方面，在PMY189-B [A] PDE的情况下，与母体菌株相比，任何高度表达菌株均未观察到显着差异。从以上提出，OGG1和MYH蛋白充当G：C-> T：人类细胞中OH^8G引起的突变的抑制剂。使用该系统，我们目前正在研究多态性蛋白质活性差异。

项目成果

Yaniaguchi, S., Shinmura, K., et al.: "A single nucleotide polymorphism at the splice of the human MYH base excision repair gene results in reducedranslation efficiency of its transcripts."Genes Cells. (in press).

Yaniaguchi, S.、Shinmura, K. 等人：“人 MYH 碱基切除修复基因剪接处的单核苷酸多态性导致其转录本的翻译效率降低。”Genes Cells。

Shinmura, K., Yamaguchi, S., et al.: "Somatic mutations and single nucleotide polymorphisms of base excision repair genes involved in the repair of 8-hydroxyguanine in damaged DNA"Cancer Lett.. 166. 65-69 (2001)

Shinmura, K.、Yamaguchi, S.等人：“参与修复受损 DNA 中 8-羟基鸟嘌呤的碱基切除修复基因的体细胞突变和单核苷酸多态性”Cancer Lett.. 166. 65-69 (2001)

Sunaga, N., Shinmura, K., et al.: "OGG1 protein suppresses G : C-->T : A mutation in a shuttle vector containing 8-hydroxyguanine in human cells"Carcinogenesis. 22. 1355-1362 (2001)

Sunaga, N.、Shinmura, K. 等人：“OGG1 蛋白抑制 G : C-->T : 人类细胞中含有 8-羟基鸟嘌呤的穿梭载体中的突变”致癌作用。

Kimura, K., Shinmura, K., et al.: "Germline p53 mutation in a patient with multiple primary cancers."Jpn. J. Clin. Oncol.. 31. 349-350 (2001)

Kimura, K.、Shinmura, K. 等人：“患有多种原发性癌症的患者中的种系 p53 突变。”Jpn。