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新規高分子量GTP総合蛋白質の細胞内局在の動態と細胞生理学的機能の解析

新型高分子量GTP合成蛋白的细胞内定位动力学和细胞生理功能分析

基本信息

批准号：
12877009
负责人：
久保義弘
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877009/
关键词：
GTP結合蛋白質 cDNA dynamin 細胞内局在

项目摘要

我々は、先にマウス脳から新規の高分子量GTP結合蛋白質のcDNAを単離した。このcDNA(nLG)は、Dynamin等の高分子量G蛋白質に類似した明確なGTP結合ドメインをもつものの、それ以外の部分においては既知の蛋白質と相同性を有しない。今回、C末端に対する抗体を用いて、コードされる蛋白について解析し、以下の知見を得た。(1)マウス脳の蛋白を用いたwestern blotでは、予想される分子量(120kDa)より小さい100と90kDaの2本のバンドが観察された。(2)cDNAを導入していない293T細胞では蛋白の発現は観察されず、導入した細胞では、120,100と90kDaの3本のバンドがみられた。組織学的にはvesicle状の細胞内局在を示した。(3)2nd MetをAlaに変えた点変異体でも発現蛋白に差異はなかった。(4)N端にFLAG-tagを付加したクローンでは、120kDaの蛋白のみが発現し、vesicle状の細胞内局在は顕著に観察されなかった。以上より、この蛋白の合成過程でN端においてプロセシングが行われること、このプロセシングが特徴的な細胞内局在に寄与することが示唆された。さらに、nLGの生理機能解明の端緒を探るべく、酵母two-hybrid法によりnLGに結合する蛋白質の検索を試みた。その結果、マウス脳cDNAライブラリーより複数種の陽性クローンを単離した。その中にはESTのみで登録されている新規遺伝子以外に、GABA_A受容体αサブユニットの1サブタイプの細胞内ドメイン、並びに3量体G蛋白質シグナル伝達系の調節因子であるRGSの1サブタイプも含まれていた。

I am a high molecular weight GTP-binding protein cDNA cDNA. High molecular weight G proteins such as cDNA (nLG) and Dynamin are similar to clear GTP Combining parts other than ドメインをもつものの, それ, においては, known proteins, and the same を有しない. This time, C-terminal に対するantibody をいて, コードされるprotein についてanalysisし, the following insights are obtained. (1) The use of western blot for protein, the molecular weight of the protein (120kDa), the small size of the protein 100, 90kDa, and the use of western blot. (2) When cDNA is introduced into 293T cells, the protein is present and the protein is detected. Introduce したcellでは、120,100と90kDaの3本のバンドがみられた. Histologically, the vesicle-like cells are localized. (3) 2nd Met をAla に変えたpoint 変 allogeneic でも発appears protein にはなかった. (4) The N-terminal FLAG-tag has a したクローンでは, a 120kDa protein has a のみが発appearし, and a vesicle-shaped のlocalization in the cell has a に観看されなかった. The synthesis process of the above より and このproteins is as follows:と, このプロセシングがが's special なcell localization and することがshows the された.さらに、nLGのphysiological function explanationの DuanxuをExplorationるべく、Yeast two-hybrid methodによりnLGにcombinationするproteinの検SOをtrialみた.そのRESULTS, マウス脳cDNAライブラリーより plural kinds of のpositive クローンを単利した.その中にはESTのみで登录されている新氝子外に、GABA_A Receiver αサブユニットの1サブタイプのIntracellular ドメイン, and びに3 body G protein シグナル伝Da system is a regulatory factor of the であるRGSの1サブタイプもcontaining まれていた.