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分裂酵母モデル系を用いたカルシニューリンシグナル伝達機構と標的遺伝子群の機能解析

利用裂殖酵母模型系统进行钙调神经磷酸酶信号转导机制和靶基因的功能分析

基本信息

批准号：
12680698
负责人：
杉浦麗子
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

研究成果:分裂酵母にカルシニューリンが存在することに着目し、細胞増殖にカルシニューリン(CN)の活性が必須であるような変異体(免疫抑制薬に感受性を示す)を10種分離し、its(immunosuppressant and temperature sensitive)変異体と命名し,原因遺伝子の同定と機能解析を行った。本年度はits3変異体およびits8変異体についての解析結果を報告する。1)its3変異体の原因遺伝子はPI45P2合成酵素であるPI4(P)5 kinaseをコードしており,種を越えて高度に保存されている。its3変異体ではPI(45)P2の量が著明に低下しており,its3遺伝子を発現するとPI(45)P2の量が増加した。its3変異体は制限温度,あるいはFK506処理により,アクチンパッチの異常と細胞質分裂異常を示すことを明らかにした。さらに,GFP-Its3は細胞膜と中隔に局在し,PI(45)P2と高い親和性を示すPLC-PHドメインの局在と一致した。以上の結果から,カルシニューリンとPI4(P)5 kinaseは協同的に分裂酵母の細胞質分裂,アクチン細胞骨格系の維持に関与していることが示唆された。(業績1)2)its8変異体の原因遺伝子はGPIアンカー合成酵素をコードしており,酵母から高等動物まで高度に保存されている。its8変異体は高温下でinositolの取り込みが著明に低下していたことから,its8変異体ではGPIアンカー合成が低下していることを明らかにした。さらに,its8変異体の表現型を解析した結果,its8変異体は細胞壁が脆弱であること,細胞質分裂と細胞極性が異常であることを示した。以上の結果から,カルシニューリンとGPIアンカー合成酵素は細胞増殖のみならず,細胞壁のintegrityの維持,細胞質分裂に重要な機能をシェアしていることが示唆された。(業績2)

Research results: the activity of mitotic yeast yeast (CN) isolates must be divided into 10 isolates (immunosuppressive susceptibility indicator) and its (immunosuppressant and temperature sensitive) isolates. The reason for this is that the cohort can be analyzed by the same machine. This year's its3 report reports the results of the analysis of the its8 data of the current year. 1) the cause of its3 infection, the PI45P2 synthesis enzyme, the PI4 (P) 5 kinase, the higher the temperature, the higher the temperature. Its3 body weight PI _ (45) P _ 2 measurement indicates low temperature, while its3 measurement shows Pi _ (45) P _ 2 dose increase. The temperature of the its3 body is limited by the temperature, the temperature. The septum is located in the septum of the membrane of GFP-Its3, the height of PI (45) P2 is high, and the sex is consistent with that of PLC-PH. As a result of the above results, the mitotic yeast cells were induced by Pi 4 (P) 5 kinase, and the cellular bone system was maintained and induced. (1) 2) the reason for its8 infection is that the synthetic enzymes are highly conserved, and the yeast is highly conserved. Under the high temperature of its8 body, the inositol device shows that it is low, while its8 body, GPI body, synthesis, low temperature, low temperature, low temperature, The results of the analysis of the body type of its8 were as follows: the cell wall of its8 was fragile, the cell was divided, the cell was divided, the cell was normal, and the cell wall was fragile. As a result of the above results, the GPI biosynthetic enzymes were isolated, the cell walls were maintained, the cell walls were maintained, and the important mechanisms of cell division were used to detect the activity of GPI enzymes. (thank you! 2)