RNA結合タンパク質を介したMAPキナーゼシグナルの制御に関する分子遺伝学的研究

通过 RNA 结合蛋白调节 MAP 激酶信号的分子遗传学研究

• 批准号: 15030229
• 负责人: 杉浦 麗子
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Kinki University (2004)Kobe University (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030229/
• 关键词: RNA結合タンパク質; タンパク質リン酸化; 酵母モデル生物; 分子遺伝学; MAPキナーゼ; 減数分裂; がん化抑制因子; MAPキナーゼホスファターゼ; 分裂酵母

分裂酵母は高等生物に極めて近い細胞内情報伝達経路を有する優れたモデル生物である。我々はMAPKシグナルのフィードバック制御に関わるRNA結合タンパク質Rnc1を同定した。本研究は分子遺伝学的手法を用いてRNA結合タンパク質の標的分子および機能的関連因子を同定し、MAPKシグナル制御におけるRNA結合タンパク質の役割を明らかにすることを目的とする。まずDNAマイクロアレイを用いてRnc1ノックアウト細胞と野生細胞で発現が変化している遺伝子群を同定した。その結果複数の翻訳に関与すると考えられる遺伝子群がノックアウト細胞で発現上昇していることが明らかとなったのでこれらの遺伝子をPCR法によりクローニングし、遺伝子破壊などの機能解析を開始した。さらに、分子遺伝学的手法により新たにRRM型のRNA結合タンパク質であるNrd1を同定した。Nrd1は従来減数分裂や分化に関与することが報告されていたが、我々はNrd1を過剰発現することで細胞分裂が異常になる変異体の温度感受性や細胞形態異常を正常に回復することを示した。この結果は、Nrd1は減数分裂や分化のステップのみならず細胞分裂や細胞形態にも重要な働きをしていることを示唆している。また、Nrd1と結合するタンパク質としてProtein kinase Cのターゲットでもある高等生物のRACK1のホモログであるcpc2+遺伝子を取得した。Cpc2ノックアウトは接合に異常を示すことからCpc2は減数分裂に重要な働きをしていることがわかった。Nrd1タンパク質とCpc2タンパク質のGFP融合タンパク質を作製し、細胞内局在を観察した結果どちらのタンパクも細胞質内に均一に局在していることが明らかとなった。

Mitotic yeast <s:1> higher organisms に extremely めて close to the intracellular information 伝 pathway を have する excellent れたモデ である organisms である. I 々 は MAPK シ グ ナ ル の フ ィ ー ド バ ッ ク suppression に masato わ る rna-binding タ ン パ ク qualitative Rnc1 を be し た. This study は molecules but 伝 learn gimmick を with い て rna-binding タ ン パ ク mass の target molecular お よ び function of masato even factor を with し, MAPK シ グ ナ ル suppression に お け る rna-binding タ ン パ ク cut を Ming ら の service quality か に す る こ と を purpose と す る. ま ず DNA マ イ ク ロ ア レ イ を with い て Rnc1 ノ ッ ク ア ウ ト cells と wild cells で 発 が now - the し て い る heritage 伝 subgroup を with fixed し た. そ の ends 訳 a plural の に masato and す る と exam え ら れ る heritage 伝 subgroup が ノ ッ ク ア ウ ト cells で 発 now rising し て い る こ と が Ming ら か と な っ た の で こ れ ら の posthumous son 伝 を PCR method に よ り ク ロ ー ニ ン グ し, but 伝 broken 壊 な ど の function analytical を began し た. さ ら に, molecular but 伝 learn technique に よ り new た に RRM type の rna-binding タ ン パ ク qualitative で あ る Nrd1 を with fixed し た. Nrd1 は 従 や differentiation to meiosis に masato and す る こ と が report さ れ て い た が, I 々 は Nrd1 を before turning 発 now す る こ と で abnormal cell division が に な る - variant の temperature sensitivity や normal cells form abnormal を に reply す る こ と を shown し た. こ の results は, Nrd1 は meiosis や differentiation の ス テ ッ プ の み な ら ず cell division や cells form に も important な 働 き を し て い る こ と を in stopping し て い る. ま た, Nrd1 と combining す る タ ン パ ク qualitative と し て Protein kinase C の タ ー ゲ ッ ト で も あ る higher biological の RACK1 の ホ モ ロ グ で あ る cpc2 + heritage 伝 child obtain を し た. Cpc2 ノ ッ ク ア ウ ト は joint に abnormal を shown す こ と か ら Cpc2 は meiosis に important な 働 き を し て い る こ と が わ か っ た. Nrd1 タ ン パ ク qualitative と Cpc2 タ ン パ ク qualitative の GFP fusion タ ン パ ク qualitative を し, intracellular bureau in を 観 examine し た results ど ち ら の タ ン パ ク も cytoplasm に uniform に bureau in し て い る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Hirayama Sonoko: "Zinc Finger Protein Prz1 Regulates Ca2+ but Not Cl- Homeostasis in Fission Yeast"J.Biol.Chem.. 278(20). 18078-18084 (2003)

平山园子：“锌指蛋白 Prz1 调节裂殖酵母中的 Ca2，但不能调节 Cl- 稳态”J.Biol.Chem.. 278(20)。

Ogiso Yasunari: "Lub1 Participates in Ubiquitin Homeostasis and Stress Response via Maintenance of Cellular Ubiquitin Contents in Fission Yeast."Mol.Cell.Biol.. 24(6). 2324-2331 (2004)

Ogiso Yasunari：“Lub1 通过维持裂殖酵母中的细胞泛素含量参与泛素稳态和应激反应。”Mol.Cell.Biol.. 24(6)。

Lub1 participates in ubiquitin homeostasis and stress response via maintenance of cellular ubiquitin contents in fission yeast

• DOI: 10.1128/mcb.24.6.2324-2331.2004
• 发表时间: 2004-03-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Ogiso, Y;Sugiura, R;Kuno, T
• 通讯作者: Kuno, T

Loss of Apm1, the AP-1 Clathrin-Adaptor mu1 Subunit, Causes Distinct Phenotypes and Synthetic Lethality with Calcineurin Deletion in Fission Yeast

裂殖酵母中 AP-1 网格蛋白接头 mu1 亚基 Apm1 的丢失会导致不同的表型和钙调神经磷酸酶缺失导致的合成致死率

• 发表时间: 2004
• 期刊: Mol Biol Cell. 15(6) Jun
• 作者: Kita A;Sugiura R;Shoji H;He Y;Deng L;Lu Y;Sio SO;Takegawa K;Sakaue M;Shuntoh H;Kuno T
• 通讯作者: Kuno T

Sugiura Reiko: "Upregulation of mRNA in MAPK Signaling : Transcriptional Activation or mRNA Stabilization?"Cell Cycle. 3(3). 286-288 (2004)

Sugiura Reiko：“MAPK 信号转导中 mRNA 的上调：转录激活还是 mRNA 稳定？”细胞周期。