TNFにより誘導される遺伝子群の同定とその治療への応用

TNF诱导基因组的鉴定及其治疗应用

• 批准号: 13204080
• 负责人: 中野 裕康
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204080/
• 关键词: TNF; アポトーシス; NF-κB; ノックアウトマウス; TRAF; MEF; マイクロアレイ; レトロウイルス

TNFはある種の腫瘍細胞にはアポトーシスを誘導することが知られているが、大多数の他の細胞にはアポトーシスを誘導せず、むしろ炎症性サイトカインの産生や接着因子などの発現上昇を誘導することから、TNF刺激時にはアポトーシスを誘導するシグナル伝達経路と同時に抗アポトーシス遺伝子の誘導がもたらされると考えられている。しかしながら、このような多彩な機能を有するTNFにより誘導される遺伝子群については完全には明らかにされていない。我々の作製したTNF receptor-associated factor(TRAF)5/TRAF2のダブルノックアウトマウス(DKO)由来の胎児線維芽細胞(MEF)はTNF刺激によるNF-κBの活性化の障害とTNF誘導性細胞死に対する感受性の亢進が認められる。そこでcDNAマイクロアレイを用い、野性型およびDKO由来のMEF細胞をTNF刺激することにより誘導される遺伝子群の発現パターンを検討し、DKO MEFで特異的に発現の低下した遺伝子群をcDNAマイクロアレイを用いて同定することを目的とした。約2万個の遺伝子のスポットされたマイクロアレイを用いた解析の結果、数百個以上の遺伝子がDKO MEFで発現の低下が認められた。そのなかでも候補遺伝子として選択した数十個の遺伝子群のノーザンブロット解析を行い、現在までに未知の遺伝子を含む8個の遺伝子で、野性型に比較しDKO MEFで顕著に発現の減少していることを確認した。そこでこれらの遺伝子のなかで抗アポトーシス機能を発揮する可能性のあるものをレトロウイルスベクターを用いてDKO MEFに遺伝子導入したが、TNF誘導性細胞死に対して抵抗性を獲得するには至らなかった。今後さらにスクリーニングを行っていく予定である。また今後はマイクロアレイ解析以外に、DKO MEFにレトロウイルスベクターで構築したcDNAライブラリーを導入し、TNF誘導性細胞死に抵抗性となるクローンを同定するというような機能的なスクリーニング方法も加えることにより、TNFにより誘導される抗アポトーシス作用の全貌を明らかにしていきたいと思っている。

TNF can induce inflammatory cells and increase the production of inflammatory cells. TNF can induce inflammatory cells and increase the production of inflammatory cells and increase the production of inflammatory cells. The function of TNF is to induce the gene subgroup to change completely. The activation of NF-κB in response to TNF stimulation and the inhibition of TNF-induced cell death are recognized by the activation of TNF receptor-associated factor(TRAF)5/TRAF2. The expression of mRNA in MEF cells derived from DKO, wild type and cDNA, and the expression of mRNA in MEF cells derived from DKO, and the expression of mRNA in MEF cells derived from DKO, were investigated. About 20,000 pieces of DNA were analyzed and hundreds of pieces of DNA were found in DKO MEF. The number of candidate genes selected from dozens of genetic subgroups was analyzed, and now the number of unknown genes included 8 genetic genes. The number of wild genes was compared with that of DKO MEF. DKO MEF has been successfully used in the production of TNF-induced cell death and the development of anti-tumor function. In the future, the number of people in the city will be determined. In the future, in addition to the analysis of TNF, DKO MEF will construct cDNA fragments for the introduction of TNF-induced cell death, resistance to TNF-induced cell death, and identification of TNF-induced cell death.

项目成果

Nakayama, M.: "Multiple pathways of TWEAK-induced cell death"J.Immunol.. 168. 734-743 (2002)

Nakayama, M.：“TWEAK 诱导的细胞死亡的多种途径”J.Immunol.. 168. 734-743 (2002)

Tada, K.: "Critical Roles of TRAF2 and TRAF5 in Tumor Necrosis Factor-induced NF-κB Activation and Protection from Cell Death"J Biol Chem. 276. 36530-36534 (2001)

Tada, K.：“TRAF2 和 TRAF5 在肿瘤坏死因子诱导的 NF-κB 激活和防止细胞死亡中的关键作用”J Biol Chem. 276. 36530-36534 (2001)

Matsushima, A.: "Essential role of nuclear factor (NF)-κB-inducing kinase and inhibitor of κB (IκB) kinase α in NF-κB activation through lymphotoxin β receptor, but not through tumor necrosis factor receptor I"J Exp Med. 193. 631-636 (2001)

Matsushima, A.：“核因子 (NF)-κB 诱导激酶和 κB (IκB) 激酶 α 抑制剂在通过淋巴毒素 β 受体激活 NF-κB 中的重要作用，但不通过肿瘤坏死因子受体 I”J Exp Med . 193. 631-636 (2001)

Okazaki, T.: "Impairment of bleomycin-induced lung fibrosis in CD28-deficient mice"J Immunol. 167. 1977-1981 (2001)

Okazaki, T.：“CD28 缺陷小鼠中博莱霉素诱导的肺纤维化受损”J 免疫学杂志。

Seino, K.: "Protection against Fas-mediated and tumor necrosis factor receptor 1-mediated liver injury by blockade of FADD without loss of nuclear factor-κB activation"Ann Surg. 234. 681-688 (2001)

Seino, K.：“通过阻断 FADD 来防止 Fas 介导和肿瘤坏死因子受体 1 介导的肝损伤，而不丧失核因子-κB 激活”Ann Surg。