分子シャペロンによる基底膜分子構築の操作と癌細胞の浸潤・転移機能の解析

分子伴侣对基底膜分子结构的调控及癌细胞侵袭转移功能分析

• 批准号: 13216053
• 负责人: 永田 和宏
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216053/
• 关键词: 分子シャペロン; HSP47; コラーゲン; 基底膜

1.細胞レベルで基底膜形成の分子機構を解析するため、すでにhsp47^<+/->、hsp47^<-/->ES細胞を樹立している。これらの細胞からembryoid bodyをつくらせ、基底膜の分子構築の動態を解析する。また、これらES細胞をレチノイン酸やcyclicAMPで分化させ、その際に誘導されるIV型コラーゲンの分子構造を調べることによって、IV型コラーゲンの分子異常がどのように基底膜形成に関与するかを明らかにする。実績:hsp47^<-/->ES細胞から作らせたembryoid bodyでは、基底膜ができないことが明らかになり、さらにIV型コラーゲンの分泌速度が遅くなっていることもわかった。2.hsp47遺伝子破壊は胎生致死となるため、マウスが成熟してからアデノウイルスによってCre遺伝子を発現させ、hsp47を破壊することによって、基底膜の構築に異常を起こさせる。このようなマウスに癌細胞を接種し、基底膜を介した遠隔転移を観察する。実際に組織中で、どのように癌細胞が基底膜を越えて浸潤・転移していくかを観察することによって、基底膜による転移の阻止能に関する情報を得る。実績:Cre遺伝子によるコンディショナルノックアウトを行うため、LoxP-hsp47遺伝子に置換したトランスジェニックマウスを樹立確立した。現在このマウスをホモにもったマウスを得る作業を行っているところであり、さらにアデノウイルスで制御されたCre遺伝子の発現系を作るところである。

1. Analysis of the molecular mechanism of basement membrane formation in cells and the establishment of hsp47^<+/-> and hsp47^<-/->ES cells Analysis of the dynamics of the molecular architecture of the basement membrane The molecular structure of type IV cells is regulated by the molecular abnormalities of type IV cells, which are related to basement membrane formation. Results:hsp47^<-/->ES cells are secreted from the embryonic body, basement membrane, and type IV cells. 2. Hsp47 gene mutation is responsible for the development of Cre gene mutation, hsp47 gene mutation, and basement membrane construction abnormality. The cells were inoculated and the basement membrane was isolated. The information on invasion, migration and prevention of tumor cells in the basement membrane is obtained. Performance:Cre Genome is the first to be established as a replacement for the LoxP-hsp47 Genome. Now, we're going to have to do something about it, and we're going to have to do something about it.

项目成果

N.HOSOKAWA: "A novel ER α-mannosidase-like protein accelerates ER-associated degradation"EMBO Reports. 2(5). 415-422 (2001)

N.HOSOKAWA：“一种新型 ER α-甘露糖苷酶样蛋白可加速 ER 相关降解”EMBO 报告 2(5)。

S.MURAKAMI: "Heat shock protein(HSP)47 and collagen are upregulated during neointimal formation in the balloon-injured rat carotid artery"Atherosclerosis. 157. 361-368 (2001)

S.MURAKAMI：“热休克蛋白 (HSP)47 和胶原蛋白在球囊损伤的大鼠颈动脉的新内膜形成过程中上调”动脉粥样硬化。

O.MATSUSHITA: "Substrate recognition by the collagen-binding domain of clostridium histolyticum class I collagenase"J.Boil.Chem.. 276(12). 8761-8770 (2001)

O.MATSUSHITA：“溶组织梭菌 I 类胶原酶的胶原蛋白结合域的底物识别”J.Boil.Chem.. 276(12)。

K.NAKATSUKASA: "Mnl1p, an α -mannosidase-like protein in yeast Saccaromyces cerevisiae, is required for ER associated degradation of glycoproteins"J.Boil.Chem.. 276(12). 8635-8638 (2001)

K.NAKATSUKASA：“Mnl1p，一种酿酒酵母中的 α-甘露糖苷酶样蛋白，是与 ER 相关的糖蛋白降解所必需的”J.Boil.Chem.. 276(12) (2001)。

M.KIKUCHI: "A single chain Fv fragment 2A3 specific for native lysozyme : Isolation from a human synthetic phage display antibody library and characterization"J. Biochem.. 129. 237-242 (2001)

M.KIKUCHI：“对天然溶菌酶具有特异性的单链 Fv 片段 2A3：从人类合成噬菌体展示抗体库中分离并表征”J.