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新しい非ウイルスベクターの創製:膜融合性リポソーム-リポプレックス複合体

创建新的非病毒载体：融合脂质体-lipoplex复合物

基本信息

批准号：
13218115
负责人：
河野健司
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リポプレックスは非ウイルスベクターとして広く用いられているが、その遺伝子導入活性は不十分である。これは、細胞に取り込まれたリポプレックスの大部分がリソソーム内で分解されるからである。従って、リソソームによる分解を逃れて、細胞内に遺伝子を移行させる能力をベクターにもたせることが高い遺伝子導入活性を実現するためのキーポイントとなる。そこで本研究では、エンドソームとの融合によって遺伝子を細胞内に導入する新しいタイプの非ウイルスベクターとして、酸性で膜融合性となるサクシニル化ポリグリシドール(SucPG)修飾リポソームとリポプレックスの複合体(SucPG複合体)を設計した。ジメチルアミノエタンカルバモイルコレステロールやジオクタデシルアンモニウムブロミドを用いてリポプレックスを調製し、これを種々の量のSucPG修飾リポソームとインキュベートすることによって、種々の組成のSucPG複合体を調製した。これらの複合体によるHeLa細胞やK562細胞へのルシフェラーゼ遺伝子の導入について調べた結果、正に帯電したSucPG複合体はリポプレックスに比べ、約2倍高い遺伝子導入活性を示したが、負に帯電したSucPG複合体は、低い活性しか示さなかった。一方、SucPG複合体にトランスフェリン(Tf)を結合したところ、遺伝子導入活性が顕著に増大した。特に負に帯電したTf結合SucPG複合体は、細胞膜上のレセプターとの特異的な相互作用によって標的細胞に取り込まれ、効率よく遺伝子を導入した。さらに、Tf結合SucPG複合体は血清により失活せず、カチオン性リポソームよりも毒性が低いなどの優れた特長を持つことが明らかになった。

The activity of gene introduction is not very high. Most of the cells in the cell are broken down. The ability to decompose and migrate genes in cells is also important. In this study, we designed a novel fusion protein complex (SucPG complex) that can be introduced into cells with a fusion protein and an acidic membrane fusion protein. The amount of SucPG modification solution used in the preparation of SucPG complexes can be adjusted by adjusting the concentration of SucPG and SucPG complexes. The results showed that the activity of gene transfer in HeLa cells and K562 cells was about 2 times higher than that in SucPG complex, and the activity of gene transfer in SucPG complex was about 2 times higher than that in HeLa cells and K562 cells. The SucPG complex was found to be more active than the Tf complex. In particular, Tf binds to SucPG complex, and specific interactions with target cells on cell membranes are introduced into target cells. The Tf-binding SucPG complex is active in the serum, inactive in the serum, active in the serum, active in the serum, and active in the serum.